肝癌细胞在不同受体趋化剂中的趋化行为及其与整合素和细胞骨架的关系

论文摘要

趋化最初是单细胞生物某些细胞最基本最原始的运动形式,像变形虫,溶组织阿米巴等靠体表任何部位形成的临时性的细胞质突起（伪足）作为运动器而运动。很多资料认为:伪足的形成是由于骨架再组装驱动,特别是肌动蛋白微丝骨架的重组。伪足作为一个突出的小泡出现在显微镜下,有时沿着下层基质变的扁平（像扁平足）,有时更圆或离开表面（像头足）。从荧光显微镜或电子显微镜发现:这个区域总是包含有密集的F-actin 微丝网络和少量的微管。尽管actin 微丝在伪足形成时所起的作用或多或少的已被接受,人们对于产生推力的机理仍旧有不同的意见。涉及到推力的模型从肌动蛋白在膜上直接起作用,到肌浆球蛋白的收缩,或可利用的凝胶渗透压驱使F-actin微丝网络凝胶化等等均被提出来说明伪足的扩展。　本文应用生物力学、细胞生物学、光镜和电镜技术以肝实质癌细胞（hepatocellular carcinoma cells,HCC）为研究对象,用不同受体的趋化剂作用于肝癌细胞SMMC-7721 株,通过微吸管吸吮技术和Boyden 小室来研究其趋化特性,观察肝癌细胞在趋化剂IV 型胶原、层粘连蛋白、组织胺作用下对细胞伪足相互作用的影响。本研究方法具有直观、精细,易定量的特点;深入研究癌细胞趋化行为和分子机制,进而防治侵袭和转移,具有现实意义。　本课题的主要研究内容及结果如下:　（1）　用单微吸管法研究肝癌细胞在IV 型胶原（type IV collagen,Col IV）、层粘连蛋白（laminin,LN）、组织胺（Histamine）趋化作用下伪足生长的动态过程,同时考察了肝癌细胞伪足的形成分别对趋化液中ColIV、LN 和组织胺浓度的依赖性。随着ColIV 趋化剂浓度的增加（100 μg/ml400 μg/ml）,HCC 细胞的伪足长度增加;当ColIV 浓度=400 μg/ml 时,细胞伪足的长度基本不变。随着LN趋化剂浓度的增加（50 μg/ml200 μg/ml）,HCC 细胞的伪足长度增加;当LN 浓度=200 μg/ml　时,细胞伪足的长度基本不变。而组织胺（0.05 ng/ml500 ng/ml）对肝癌细胞无趋化特性。　（2）　应用双微吸管法研究浓度不对称趋化实验中双侧伪足形成的相互影响和趋化剂种类不同时趋化性伪足形成的强度。结果表明:一侧ColIV 浓度固定,另一侧随着组织胺浓度升高,细胞伪足长度逐渐降低;双侧伪足一侧因组织胺趋化浓度升高而伪足生成减弱并未使另一侧伪足生成增强。随着组织胺浓度增加（0.5 ng/ml50 ng/ml）组织胺浓度为0.5 ng/ml,5 ng/ml 和50 ng/ml 时,伪足的峰值长度分别为3.03±0.54 μm,0.94±0.52 μm,2.07±0.55 μm。,伪足的峰值在5 ng/ml

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 绪论
• 1.1 问题的提出及研究意义
• 1.2 国内外研究现状
• 1.3 趋化因子与肿瘤的生长
• 1.4 肿瘤细胞与侵袭转移
• 1.5 基质金属蛋白酶和肝癌的侵袭
• 1.6 本文的研究目的和内容
• 1.6.1 本文研究的目的
• 1.6.2 本文研究的主要内容
• 2 不同受体的趋化剂对肝癌细胞伪足形成的影响
• 2.1 前言
• 2.2 实验材料和方法
• 2.2.1 实验材料
• 2.2.2 实验方法
• 2.3 实验结果
• 2.3.1 单微管趋化性伪足形成实验结果
• 2.3.3 双微管趋化性伪足形成实验结果
• 2.4 分析和讨论
• 2.5 小结
• 3 微丝骨架干扰剂对肝癌细胞伪足形成的影响
• 3.1 前言
• 3.2 单微吸管趋化实验
• 3.2.1 实验材料
• 3.2.2 实验方法
• 3.2.3 实验结果
• 3.3 免疫组织化学实验
• 3.3.1 实验材料
• 3.3.2 实验方法
• 3.3.3 实验结果
• 3.4 透射电镜实验
• 3.4.1 实验材料
• 3.4.2 实验方法
• 3.4.3 实验结果
• 3.5 分析和讨论
• 4 整合素单抗对肝癌细胞伪足形成的影响
• 4.1 前言
• 4.2 实验材料和方法
• 4.2.1 实验材料
• 4.2.2 实验仪器
• 4.2.3 实验方法
• 4.3 实验结果
• 4.3.1 CD49a、CD49d 对肝癌细胞伪足形成的影响
• 4.3.2 CD496、CD49c 对肝癌细胞伪足形成的影响
• 4.4 分析和讨论
• 4.5 小结
• 5 Boyden小室用于肝癌细胞趋化迁移性实验
• 5.1 前言
• 5.2 实验材料和方法
• 5.2.1 实验材料
• 5.2.2 实验方法
• 5.3 实验结果
• 5.3.1 IV 型胶原对肝癌细胞趋化性影响
• 5.3.2 细胞松弛素D 对肝癌细胞趋化性的影响
• 5.3.3 组织胺对肝癌细胞趋化性影响
• 5.4 分析和讨论
• 5.5 小结
• 6 结论与展望
• 6.1 结论
• 6.2 后续工作的建议
• 7 趋化性实验方法和细胞培养方法
• 7.1 细胞趋化性实验设备及方法
• 7.1.1 实验设备及主要器材
• 7.1.2 实验方法及步骤
• 7.2 细胞培养方法
• 7.2.1 人的肝癌细胞的培养
• 致谢
• 参考文献
• 作者在攻读硕士期间发表的论文目录
• 作者在攻读硕士期间参加的科研项目
• 独创性声明
• 学位论文版权使用授权书