子宫内膜肥大细胞介质与奶牛子宫内膜炎关系的研究

论文摘要

奶牛子宫内膜炎是产后多发的繁殖障碍性疾病,研究表明,产后子宫均会受到包括条件致病菌在内的细菌污染,但能否引起子宫内膜炎,则取决于子宫免疫状态。在生殖周期中子宫肥大细胞（Mast Cell,MC）数量和颗粒状态呈规律性变化,参与调节子宫内膜结构和功能,而对子宫免疫起决定作用的子宫内膜结构是子宫内膜炎发生的关键因素。MC通过其介质发挥其生物学功能并参与炎症反应,据报道,检测尿中组胺（Histamine,HA）可作为诊断子宫内膜炎依据,可见MC介质与子宫内膜炎存在必然联系。目前关于MC在感染及子宫生理方面均有较多报道,但MC介质在子宫内膜炎过程中的作用,尚不清楚。为此,本实验以产后急性子宫内膜炎患牛为研究对象,通过ELISA检测LTB4、HA、IgE、PGF2α、P4和E2的含量,荧光定量PCR检测H1R、H2R、ESR-1、PGR、BLT2等mRNA表达,及子宫内膜超微结构观察,以探讨MC介质在子宫内膜炎中的作用机制,为揭示子宫内膜炎发病机理奠定基础。结果表明:1.实验组子宫内膜PGF2α浓度为9.949±0.831 ng/mL,血清P4浓度为17.108±0.507 ng/mL,对照组分别为40.525±10.847 ng/mL、8.734±0.542 ng/mL,实验组与对照组相比差异均极显著（P<0.01）,说明子宫来源的PGF2α变少,抑制黄体消退,导致P4浓度相对较高。2.实验组子宫内膜LTB4浓度为78.842±12.552 pg/mL,HA为74.378±3.962 ng/mL,对照组分别为23.143±1.117 pg/mL,32.547±4.054 ng/mL,组间差异均极显著（P<0.01）。实验组与对照组子宫内膜中IgE浓度分别为11.398±1.342μg/mL、6.596±0.202μg/mL,二者差异显著（P<0.05）。说明子宫内膜炎时LTB4、HA的高浓度与IgE有关。3.实验组子宫内膜MC核固缩,胞质稀疏,颗粒空泡化;对照组MC核仁清晰,颗粒较多,分布均匀。表明子宫内膜炎时子宫内膜MC脱颗粒,释放介质,参与子宫机能调节。4.实验组子宫内膜H1R mRNA水平显著低于对照组（P<0.05）,H2R mRNA水平极显著高于对照组（P<0.01）,同时BLT2基因mRNA水平极显著高于对照组（P<0.01）。说明子宫内膜H1R和H2R表达失衡,使子宫免疫力降低,而LTB4通过BLT2引起子宫内膜病理性损伤。5.实验组子宫内膜PGR mRNA水平极显著高于对照组（P<0.01）,ESR-1 mRNA水平极显著低于对照组（P<0.01）,二者对子宫收缩具有抑制作用。综上所述,子宫内膜炎过程中IgE诱导MC脱颗粒,引起HA和LTB4浓度显著增加,推测存在I型超敏反应;子宫内膜H1R和H2R mRNA表达失衡,使子宫免疫力降低;BLT2 mRNA高表达导致子宫病理损伤;PGR高表达,ESR-1低表达,抑制子宫收缩,这与子宫内膜产生PGF2α减少有关。而子宫内膜炎时,高浓度P4如何通过MC PGR,调控MC介质释放,还有待于深入研究。因此,子宫内膜MC介质通过其受体影响子宫内膜的生理机能,进而促进子宫内膜炎的发生发展。

论文目录

• 摘要
• 英文摘要
• 1. 前言
• 1.1 子宫内膜炎时子宫局部血液循环特征
• 1.2 子宫MC 与子宫机能
• 1.2.1 子宫MC 分布特征
• 1.2.2 子宫MC 在生殖周期中的作用
• 1.2.3 MC 与感染
• 1.3 MC 介质与子宫感染
• 1.3.1 HA 与感染
• 1.3.2 白三烯B4 与感染
• 1.3.3 其他介质
• 1.4 神经-体液对子宫MC 的调节
• 1.5 激素对MC 的调节作用
• 1.6 实验目的与意义
• 2. 材料和方法
• 2.1 实验动物
• 2.2 样品的采集
• 2.3 实验仪器及试剂
• 2.3.1 主要仪器
• 2.3.2 主要试剂
• 2.4 检测项目及方法
• 4、HA、IgE、PGF2α、P₄ 等浓度的ELISA 检测'>2.4.1 LTB₄、HA、IgE、PGF2α、P₄ 等浓度的ELISA 检测
• 2.4.2 子宫内膜透射电镜观察
• 1R、H₂R、BLT2、ESR-1、PGR mRNA 表达'>2.4.3 荧光定量PCR 检测H₁R、H₂R、BLT2、ESR-1、PGR mRNA 表达
• 2.5 数据统计
• 3. 结果与分析
• 4、E₂ 浓度检测结果'>3.1 PGF2α、P₄、E₂浓度检测结果
• 4、HA 及IgE 浓度检测结果'>3.2 子宫内膜LTB₄、HA 及IgE 浓度检测结果
• 3.3 子宫内膜超微结构
• 1R、H₂R、ESR-1、PGR 和BLT2 mRNA 表达检测结果'>3.4 H₁R、H₂R、ESR-1、PGR 和BLT2 mRNA 表达检测结果
• 3.4.1 子宫内膜总RNA 提取结果
• 1R、H₂R、BLT2、ESR-1 和PGR 基因PCR 产物鉴定结果'>3.4.2 H₁R、H₂R、BLT2、ESR-1 和PGR 基因PCR 产物鉴定结果
• 1R、H₂R、BLT2、ESR-1、PGR mRNA 荧光定量PCR 方法建立'>3.4.3 H₁R、H₂R、BLT2、ESR-1、PGR mRNA 荧光定量PCR 方法建立
• 1R、H₂R 和BLT2 mRNA 表达检测结果'>3.4.4 子宫内膜H₁R、H₂R 和BLT2 mRNA 表达检测结果
• 3.4.5 子宫内膜ESR-1、PGR mRNA 表达检测结果
• 4. 讨论
• 4.1 激素浓度的变化对子宫内膜炎的影响
• 4.2 子宫内膜超微结构的变化
• 4.3 MC 介质及其受体与子宫内膜炎的关系
• 4.3.1 HA 及其受体与子宫内膜炎的关系
• 4、BLT2 与子宫内膜炎的关系'>4.3.2 LTB₄、BLT2 与子宫内膜炎的关系
• 4.4 ESR-1、PGR 在子宫内膜炎发病机制中的作用
• 5. 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 攻读硕士期间发表的学术论文