论文摘要
急性白血病（acute leukemia,AL）是一类由遗传因素与环境因素共同作用所导致的造血系统恶性肿瘤,异质性强,其发生和发展过程中涉及的大量分子水平的异常,决定了对治疗的反应和预后的不同。然而目前的分型方案不能反映疾病的分子特征,与治疗和预后缺乏关联性。目前AL的分型诊断主要依据以细胞形态学和组织化学为基础的FAB分型方案,诊断准确率低且不能反映疾病的本质特征。尽管近十年来流式细胞术免疫分型已成为诊断造血系统肿瘤的必需方法,然而用于免疫分型的细胞表面分化抗原仅占总抗原非常小的比例,仍有大量异常表型未阐明,无法指导临床进行个体化治疗。为寻找能反映疾病本质、对诊断和治疗有参考价值的分子靶点,从而建立更科学的白血病分型标准,本研究从膜蛋白表达谱、胞浆蛋白表达谱、细胞因子分泌谱3个方面进行研究,利用流式细胞术、蛋白质组学等技术分析不同来源和分化程度的急性白血病蛋白表达特征。采用三色多参数流式细胞术和单克隆抗体对不同亚型AL（以形态学基础分型的M1、M2、M3、M4、M5和ALL）细胞膜抗原进行分析,结果显示免疫分型可以明确淋系白血病细胞来源和分化程度,弥补形态学分型的不足,但对粒系与单核系急性白血病缺乏特异性分型指标。采用流式细胞术检测白血病干细胞（LSC）相关抗原CD96、CD90、CD123、CD71等在不同亚型AL（M1、M2、M3、M4、B-ALL）细胞膜的表达,首次发现CD96在AML的表达率显著高于ALL,且AML各亚型中M3的表达率最高,可用来区分AML和ALL,并指示粒系的分化程度;CD71在AML阳性表达率显著高于ALL,可用于鉴别ALL和AML;与对照组相比,各亚型急性白血病均高表达CD123,无系列、亚型差异,可作为微小残留病变的监测指标;CD90在AML中均未见表达,在B-ALL中表达率为13.3%,但无统计学意义,有待于扩大标本量进一步证实。采用双向凝胶电泳结合串联飞行时间质谱技术,建立了不同亚型AL（M1、M2、M3、M4、M5和ALL）胞浆内特异蛋白质差异表达谱,共鉴定了38个差异蛋白质点。首次发现PFN1在粒系中低表达,可能作为粒系与淋系、单核系AL鉴别的标志物;S100A10仅在M1中低表达,其他亚型AL高表达,可能用来指示粒系分化程度。MPO、PRDX3以及ARHGDIB分别在粒系和淋系AL中有特异性表达,可作为这两类白血病的标志物;髓系高表达的蛋白HNRNP A1、40S ribosomal protein S12可能在区分AML和ALL中起重要的作用。采用流式细胞CBA Flex Set技术同时定量检测AL血清中3种细胞因子,结果显示AL血清中IL-6、IL-10、TNF含量比正常组显著增高,提示可能与AL的发病机制有相关性;IL-6水平在AML亚型间有差异,M1表达最高;IL-10、TNF水平在ALL中高于AML,提示可能在淋系和髓系细胞分化中的作用有差异。