一株功能性益生菌生物学功能的初步研究

论文摘要

通过对一株新分离的功能性益生菌FQ15生长特性及生物学特性的系统研究得出,FQ15属于粪肠球菌,耐氧厌氧菌,在有氧及无氧的条件下均能正常生长。其生长特性试验结果表明,该株新分离益生菌最优发酵培养基组成为大豆蛋白胨3%,酵母粉0.5%,葡萄糖3%。FQ15的最佳生长条件为培养基的初始pH值为7.5,培养温度为37℃,同时测定出FQ15生长曲线中一个周期为11小时。在上述条件下进行发酵培养其菌数每毫升可以达到160亿。生物学特性实验结果显示,FQ15对7种常见的抗生素有耐药性。在pH值不低于3.0的环境下能够正常的生长,能够耐受0.1%～0.7%浓度的胆盐。对8种常见致病菌均具有很好的抑菌效果,在与致病菌混合培养中36小时内可以彻底清除金黄色葡萄球菌,48小时内可以完全消灭大肠杆菌。建立了反相高效液相色谱法,测定此株益生菌发酵液中有机酸的主要成分及其在发酵不同时间的变化趋势。同时,免疫实验结果证明了FQ15具有增强机体体液免疫的作用。以荧光标记物作为指示系统,首次成功监测到功能性益生菌FQ15与肉鸡消化道的动态结合过程及不同时间排泄物中荧光强弱变化,确定菌株在机体内的代谢规律,结果表明FQ15能够在十二指肠上皮细胞定植并大量增殖,生长周期为110小时。在实验室研究基础上,将此株功能性益生菌研制成微生态制剂,应用于大规模肉鸡养殖现场,结果表明益生菌FQ15可显著促进肉鸡生长,改善肠道环境,能较大程度上减少抗生素的使用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 益生菌的来源、种类
• 1.2 益生菌的作用机理
• 1.2.1 有利于恢复消化道正常微生物区系
• 1.2.1.1 与致病菌竞争消化道上皮细胞的附着位点
• 1.2.1.2 与有害菌竞争营养物质
• 1.2.1.3 生物夺氧学说
• 1.2.1.4 产生抑菌物质
• 1.2.2 提高免疫功能
• 1.2.2.1 益生菌对肠道黏膜的细胞免疫作用
• 1.2.2.2 益生菌对肠道黏膜的体液免疫作用
• 1.2.3 提高消化吸收功能
• 1.2.3.1 产生多种酶类并提高动物消化酶活性
• 1.2.3.2 增强机体肠道吸收能力
• 1.3 益生菌在家禽生产中的应用
• 1.4 国内外益生菌生产应用现状
• 1.4.1 国外益生菌生产应用现状
• 1.4.2 国内益生菌生产应用现状
• 1.5 益生菌研究存在的问题
• 1.5.1 缺乏行之有效的研究平台
• 1.5.2 菌株作用效果的重复性差
• 1.5.3 缺乏技术标准
• 1.6 展望
• 1.6.1 益生菌作用机理研究仍然是核心问题
• 1.6.2 保证益生菌产品质量
• 1.6.3 安全性日益重要
• 1.6.4 注重研究益生菌的免疫协同作用
• 1.6.5 益生菌生物学功能的研究将更加紧迫
• 1.6.6 益生菌的相关标准应与国际接轨
• 1.7 立题意义及主要研究内容
• 1.7.1 立题意义
• 1.7.2 主要研究内容
• 第二章 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 菌株来源
• 2.1.2 实验动物
• 2.1.3 主要试剂与药品
• 2.1.4 主要溶液及培养基的配制
• 15基因组所用溶液配制'>2.1.4.1 提取FQ₁₅基因组所用溶液配制
• 2.1.4.2 琼脂糖凝胶电泳所用溶液配制
• 2.1.4.3 溶血空斑实验所用溶液配制
• 2.1.4.4 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳所用溶液配制
• 2.1.4.5 荧光标记菌体实验所用溶液配制
• 2.1.4.6 反相高效液相色谱实验中流动相的配制
• 2.1.4.7 培养基的配制
• 2.1.4.8 实验过程中使用的PBS溶液的配制
• 2.1.5 主要仪器设备
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 形态观察
• 2.2.1.1 菌落形态观察
• 2.2.1.2 菌体在显微镜下形态观察
• 2.2.2 生化鉴定
• 2.2.3 生长特性试验
• 2.2.3.1 氧气对菌体影响试验
• 2.2.3.2 最适生长pH值测定
• 2.2.3.3 最适生长温度测定
• 2.2.3.4 最适营养条件的研究
• 15增殖的影响'>2.2.3.4.1 不同碳源对FQ₁₅增殖的影响
• 15增殖的影响'>2.2.3.4.2 不同氮源对FQ₁₅增殖的影响
• 2.2.3.4.3 优化培养基正交试验
• 2.2.3.5 生长曲线测定
• 2.2.4 生物学特性实验
• 2.2.4.1 药物敏感性实验
• 2.2.4.2 耐受胆盐实验
• 2.2.4.3 耐酸实验
• 2.2.4.4 抑菌谱测定
• 2.2.4.5 混合培养拮抗病原菌实验
• 15发酵液中的有机酸'>2.2.4.6 反相高效液相色谱法测定FQ₁₅发酵液中的有机酸
• 2.2.4.7 促进动物机体免疫功能实验
• 2.2.4.7.1 分光光度法测小白鼠溶血空斑实验
• 2.2.4.7.2 血清凝集素实验
• 15与肠道上皮细胞粘附性体外实验'>2.2.4.8 FQ₁₅与肠道上皮细胞粘附性体外实验
• 2.2.4.9 菌体与机体的动态结合规律
• 15菌体结构检测'>2.2.5 FQ₁₅菌体结构检测
• 15基因组的提取及RFLP图谱的测定'>2.2.5.1 FQ₁₅基因组的提取及RFLP图谱的测定
• 15基因组'>2.2.5.1.1 提取FQ₁₅基因组
• 15基因组及RFLP图谱的测定'>2.2.5.1.2 FQ₁₅基因组及RFLP图谱的测定
• 15菌体蛋白'>2.2.5.2 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）分析FQ₁₅菌体蛋白
• 2.2.6 促动物生长功能实验
• 15对肉鸡生产性能的现场应用效果观察'>2.2.7 FQ₁₅对肉鸡生产性能的现场应用效果观察
• 第三章 结果与讨论
• 3.1 实验结果
• 15菌落形态和培养特征'>3.1.1 FQ₁₅菌落形态和培养特征
• 15生化鉴定结果'>3.1.2 FQ₁₅生化鉴定结果
• 15生长特性试验结果'>3.1.3 FQ₁₅生长特性试验结果
• 3.1.3.1 氧气对菌体影响试验结果
• 15最适生长pH值'>3.1.3.2 FQ₁₅最适生长pH值
• 15最适生长温度'>3.1.3.3 FQ₁₅最适生长温度
• 15生长的最优培养基筛选结果'>3.1.3.4 适合FQ₁₅生长的最优培养基筛选结果
• 15增殖的影响结果'>3.1.3.4.1 不同碳源对FQ₁₅增殖的影响结果
• 15增殖的影响结果'>3.1.3.4.2 不同氮源对FQ₁₅增殖的影响结果
• 3.1.3.4.3 优化培养基正交试验结果
• 15生长曲线'>3.1.3.5 FQ₁₅生长曲线
• 15生物学特性试验结果'>3.1.4 FQ₁₅生物学特性试验结果
• 3.1.4.1 药物敏感性实验结果
• 3.1.4.2 耐受胆盐实验结果
• 3.1.4.3 耐酸实验结果
• 3.1.4.4 抑菌谱的测定结果
• 3.1.4.5 混合培养拮抗病原菌实验结果
• 139实验结果'>3.1.4.5.1 混合培养拮抗大肠杆菌O₁₃₉实验结果
• 3.1.4.5.2 混合培养拮抗金黄色葡萄球菌实验结果
• 15发酵液中的有机酸实验结果'>3.1.4.6 反相高效液相色谱法测定FQ₁₅发酵液中的有机酸实验结果
• 3.1.4.6.1 液相色谱检测方法的建立
• 3.1.4.6.2 七种有机酸定量参数的确定
• 15发酵液中有机酸的HPLC检测'>3.1.4.6.3 FQ₁₅发酵液中有机酸的HPLC检测
• 3.1.4.7 促进动物机体免疫功能实验结果
• 3.1.4.7.1 分光光度法测小白鼠溶血空斑实验结果
• 3.1.4.7.2 血清凝集素实验结果
• 15与肠道上皮细胞粘附性体外实验结果'>3.1.4.8 FQ₁₅与肠道上皮细胞粘附性体外实验结果
• 3.1.4.9 菌体与机体的动态结合规律
• 15菌体结构检测结果'>3.1.5 FQ₁₅菌体结构检测结果
• 15基因组实验结果'>3.1.5.1 提取FQ₁₅基因组实验结果
• 15基因组及RFLP图谱的测定结果'>3.1.5.2 FQ₁₅基因组及RFLP图谱的测定结果
• 15菌体蛋白实验结果'>3.1.5.3 SDS—PAGE分析FQ₁₅菌体蛋白实验结果
• 3.1.6 促动物生长功能实验结果
• 15对肉鸡生产性能的现场应用效果观察结果'>3.1.7 FQ₁₅对肉鸡生产性能的现场应用效果观察结果
• 15微生态制剂对肉鸡生长性能影响'>3.1.7.1 FQ₁₅微生态制剂对肉鸡生长性能影响
• 15微生态制剂对肉鸡肠道壁的影响'>3.1.7.2 FQ₁₅微生态制剂对肉鸡肠道壁的影响
• 3.2 讨论
• 第四章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录