脑胶质瘤标本库的初步建立及EphB4、CD105在人脑胶质瘤中的表达及意义

论文摘要

目的:随着对脑胶质瘤分子生物学的广泛研究,有关的研究机构对各种肿瘤标本的需求日益增长,特别是在人类后基因组计划开始以后,这种需求更加的迫切。既往研究人员只是根据某个研究课题的需要,进行临时的肿瘤标本收集,使得大量的各种有价值的肿瘤标本和相关资料流失,给肿瘤的深入研究带来极大的损失。本课题建立胶质瘤标本库的目的和意义就在于为脑胶质瘤的基础、临床以及分子生物学的深入研究提供重要的标本来源和患者资料,并在DNA、RNA的提取、分析和一些特殊肿瘤细胞系的建立方面,提供了一个重要基础。在临床工作中我们知道,胶质瘤为最常见的神经上皮肿瘤,即使采取手术、放疗、化疗等综合治疗措施,仍然疗效差,生存期短。调控肿瘤生长的因子的确认将会促进诊断、治疗,改善预后。Ephs受体被认定为神经元迁徙指导因子,其后发现其为血管成形和胚胎形成的关键调控因子,最近发现其参与肿瘤形成及瘤性血管新生。而近年来随着对转化生长因子（TGF-β）研究的深入,发现该细胞因子在体外可抑制内皮细胞（EC）的生长,而在体内却可通过结合炎症细胞诱导其释放血管生成因子刺激EC分裂增殖,同时还可影响细胞分化、细胞间质的代谢和免疫功能。TGF-β的这些功能是通过结合特异性受体实现的,CD105就是其受体家族的一员。鉴于肿瘤和肿瘤性新生血管的密切关系,而EphB4和CD105又具有此双重功能,因此本实验着眼于研究EphB4和CD105在人脑胶质瘤中的表达情况,同时在胶质瘤标本库的建立方面做初步尝试。方法:收集河北医科大学第二医院神经外科2006年12月-2007年6月手术治疗的50例胶质瘤病人（其中男性34例,女性16例）的手术标本,年龄17-75岁,平均年龄46.82±14.69岁。另取颅脑损伤后开颅内减压术中切除的正常脑组织5例作为对照。按WHO（2000年修改）神经系统肿瘤分类标准明确病理诊断（分类和分级）,其中Ⅱ级27例,Ⅲ级13例,Ⅳ级10例。采用免疫组织化学技术和半定量RT-PCR技术检测5例正常脑组织及50例胶质瘤组织中的EphB4、CD105表达情况,并计数微血管密度（MVD）。免疫组化结果判定:以肿瘤细胞阳性百分数及染色强度进行肿瘤细胞阳性计分,首先在高倍镜下二人单盲计数1000个肿瘤细胞,根据阳性瘤细胞数目所占百分比分为4级:Ⅰ级0分, < 10 %;Ⅱ级1分, 10 %～25 %;Ⅲ级2分,25 %～50 %;Ⅳ级3分,50 %以上。按瘤细胞着色的深浅计分染色强度:1分,弱;2分,中等;3分,强。2个分值相加即为该标本的免疫组化阳性计分:0～1分为阴性,记为（-）;2～4分为弱阳性,记为（+）;5分以上为阳性,记为（++）。计数微血管密度的方法:瘤组织内阳性着色的单个内皮细胞或内皮细胞簇计为1个阳性血管标记,每例观察切片1张,避开肿瘤坏死或出血区域,在低倍镜（40×）下选择微血管最丰富区,即“热点”（’hot spot’） ,在高倍视野（400×）下计数,计数5个400倍视野下的血管数,其算术平均数计为该例切片的MVD测定值。不同组别胶质瘤的MVD用（X|-）±S表示。统计学方法:根据数据采集的不同方法及统计学处理的不同要求,选用Kruskal-Wallis H检验、Nemenyi检验、单因素方差分析和Spearman等级相关分析统计学方法。使用SPSS14.0统计软件处理。P<0.05有统计学意义。结果:1.免疫组化结果5例正常脑组织中EphB4和CD105蛋白不表达或表达很弱,50例脑胶质瘤中,EphB4和CD105分别定位于肿瘤细胞膜及血管内皮细胞膜上,EphB4和CD105阳性和强阳性表达分别为37例和25例,表达水平随肿瘤恶性程度增加而升高,EphB4蛋白除在正常脑组织与Ⅱ级、Ⅲ级与Ⅳ级之间表达无显著性差异（P>0.05）外,其余两两之间的差异均具有显著性（p<0.05）,且表达强度和胶质瘤的病理分级呈正相关(rEphB4=0.608,rCD105=0.856,p=0.000)。2. RT-PCR结果1.2%琼脂糖凝胶结果显示,在分子量139bp左右和396bp左右分别可以得到EphB4和CD105的PCR产物信号,正常脑组织中低表达,不同级别胶质瘤的表达水平随肿瘤恶性程度增加而升高。阴性对照以无RNase水替代AMV逆转录酶。两两之间的差异具有显著性（p<0.05）,且表达强度和胶质瘤的病理分级呈正相关（rEphB4=0.899,rCD105=0.904,p=0.000）。在分子量500bp左右可以得到β-actin的PCR产物信号。正常脑组织和各个级别胶质瘤中均呈高表达,表达水平大致相等。结论:1. EphB4在人脑胶质瘤中呈高表达,随肿瘤级别的增高而表达增强,且与病理分级呈正相关关系。2. CD105在人脑胶质瘤中亦呈高表达,随肿瘤级别的增高而表达增强,且与病理分级呈正相关关系。3. EphB4和CD105与人脑胶质瘤的分化程度和血管生成密切相关,二者的过度表达与肿瘤的发展和促进血管的生成起重要作用,二者从增殖活性和血管生成两个不同的侧面反映了肿瘤细胞的生长侵润能力。利用EphB4和CD105来判断肿瘤的恶性程度和病理特征,是一个很好的参考指标。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 脑胶质瘤标本库的初步建立及EphB4、CD105 在脑胶质瘤中的表达及意义
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 EphB4、CD105 与肿瘤及血管生成的关系
• 致谢
• 个人简历