简化SSR体系在小麦品种纯度检测中的用

论文摘要

本文概述了检测品种纯度的常用方法并比较了几种分子标记检测品种纯度的优缺点,同时以5个小麦品种和43对SSR引物为材料,对SSR分析程序进行了研究,其目的是建立一套准确、经济和快捷的SSR分析体系,并对建立的体系用60个小麦常规品种和18个杂交种进行了验证。（1）比较了7种方法分别提取小麦种子、种胚和幼苗叶片DNA的质量和提取所用时间,以CTAB法3最为经济、快捷。（2）比较了模板DNA、Mg2+、dNTPs和Taq酶不同用量对PCR扩增的影响,建立了适用于小麦品种纯度检测的PCR反应体系。（3）比较了3种银染方法,从中筛选出一种方便、快捷的方法:染色液（10%乙醇,0.5%乙酸和0.2%硝酸银）染色5min,蒸馏水漂洗25s,显影液（3.0%氢氧化钠,0.5%甲醛）显影,蒸馏水漂洗5 min。（4）从43对小麦SSR引物筛选出12对纯度检测专用引物,并对12对引物进行两重PCR反应研究,其中10个两重PCR引物组合可以应用在今后小麦种子纯度检测中;对12对专用SSR引物扩增的PCR产物进行两重、三重电泳,实验表明12对引物扩增的PCR产物都可以采用多重电泳分离。（5）应用上述体系检测了61个常规品种和18个杂交种的纯度。结果表明该体系可以得到与原体系同样的效果,而且节省了50%的实验时间和62%的实验成本。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 纯度检测的重要性.
• 1.2 纯度检测的常用方法.
• 1.3 几种分子标记在检测纯度中的比较
• 1.4 本研究的目的和意义
• 2 实验材料和方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 小麦材料
• 2.1.2 SSR 引物
• 2.1.3 试剂及仪器
• 2.2 方法
• 2.2.1 小麦基因组 DNA 提取
• 2.2.2 DNA 浓度和质量检测
• 2.2.3 各方法的成本及耗时计算方法
• 2.2.4 PCR 扩增
• 2.2.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳
• 3 结果和分析
• 3.1 SSR 分析体系的简化
• 3.2 纯度检测专用SSR 引物的确立
• 3.3 小麦品种纯度检测
• 4 讨论
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 作者简介