论文摘要
单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一种可引起流产、败血症、脑膜炎等严重侵袭疾病的食源性病原菌,其易感人群主要为孕妇,老人,新生儿和免疫缺陷人群。本研究对LB增菌液、BLEB增菌液和Fraser增菌液进行选择性增菌比对,OXA、PALCAM、MMA和科玛嘉李斯特菌显色培养基进行选择性分离比对。最终确定LB肉汤为单核细胞增生李斯特菌选择性增菌液、科玛嘉李斯特菌显色培养基和PALCAM培养基为单核细胞增生李斯特菌选择性分离培养基,同时增加了初筛步骤;本研究方法检验灵敏度为1-10cfu/25g（ml）。本研究方法经过相关实验室证实,并于2008年3月通过卫生部食品卫生标准化专业委员会审查,形成报批稿。本研究采用微量肉汤稀释法测定了源自中国食源性疾病监测网467株食源性单核细胞增生李斯特菌对庆大霉素、氨苄西林、青霉素、四环素、强力霉素、亚胺培南、红霉素、环丙沙星、左旋氧氟沙星、头孢噻吩、利福平、万古霉素、氯霉素、氨苄西林/舒巴坦酸、复方新诺明15种抗生素的药敏结果。467株单核细胞增生李斯特菌耐药率为4.5%,主要耐受四环素和环丙沙星,四环素耐受最严重,耐药率达4.07%,但未发现多重耐药株。在七类食品中,分离自蔬菜的单核细胞增生李斯特菌的耐药率最高,为10%。在14个省市中,吉林、湖北、河北的耐药率居前三位,分别为19.6%,9.1%,8%。我国食源性单核细胞增生李斯特菌存在耐药株,分离自不同食品、不同省份的单核细胞增生李斯特菌耐药性存在差异,应加强对预防用药和临床用药的重视,以减少单核细胞增生李斯特菌耐药性的增加。单核细胞增生李斯特菌已知的两个毒力岛LIPI-1（prfA,plcA,hly,mpl,actA,plcB）和LIPI-2（inlA,inlB,inlC,inlC2,inlO,inlE,inlF,inlG,inlH）。本研究利用PCR方法对单核细胞增生李斯特菌的两个毒力岛的八种毒力基（prfA,plcA,hly,mpl,actA,plcB,inlA,inlB）及一种毒力相关基因（iap）进行检测。prfA基因检出率为87.2%,plcA基因检出率98.7%,hly基因检出率97.4%,mpl基因检出率87.2%,actA基因检出率98.7%,plcB基因检出率98.7%,inlA基因检出率92.3%,inlB基因检出率100%,iap基因检出率98.7%。LIPI-1的毒力基因缺失现象远远超过LIPI-2的毒力基因缺失现象。78株食源性单核细胞增生李斯特菌中21株菌出现毒力基因缺失现象,缺失率为26.9%。除了inlB外其余毒力基因都存在不同程度缺失现象,有的菌株出现了两种或两种以上毒力基因缺失现象（最多为4种）。毒力基因分布与分离菌株的地域没有显著关系,与分离菌株的食品种类有关,熟食中分离的单核细胞增生李斯特菌毒力基因缺失现象非常显著。通过血清学分型、核糖体自动化分型对78株食源性单核细胞增生李斯特菌进行分型研究。血清学分型显示,1/2a、1/2c和1/2b三种血清型占我国食源性单核细胞增生李斯特菌血清型的前三位（56.41%、15.38%和14.10%）,特别是1/2a型菌株在我国食品中分布最为广泛。而耐药菌株及毒力基因缺失株中绝大多数菌株血清型均为国外报道易引起人类感染李斯特菌病的1/2a（20/44）、1/2b（8/11）和4b（2/4）型。核糖体分型方法对78株单核细胞增生李斯特菌分别采用了两种限制性内切酶PVUⅡ和ECORⅠ,结果显示ECORⅠ将78株单核细胞增生李斯特菌分为33个核糖体型,聚类为8个核糖体群;PVUⅡ将78株单核细胞增生李斯特菌分为38个核糖体型,聚类为6个核糖体群,PVUⅡ分型效果要优于ECORⅠ分型效果。耐药菌株聚类在某些核糖体群中,毒力基因缺失与核糖体分型未发现有显著关系,血清分型与核糖体分型有一定关系。经过两种限制性内切酶的核糖体分型与菌株来源比对,我们发现分离菌株的地域性与核糖体型间没有显著关系,但是分离菌株的食品种类却与核糖体型存在一定关系,PVUⅡ的核糖体型与分离菌株的食品种类关系更为显著,其中从生肉类分离出的菌株更多的聚集为某些核糖体型,如PVUⅡ-7、PVUⅡ-18和PVUⅡ-28;而从熟食与蔬菜分离出的菌株更多的聚集在其他的核糖体型中,如PVUⅡ-1、PVUⅡ-3、PVUⅡ-13和PVUⅡ-31。
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