TRAIL诱导胃腺癌细胞凋亡的调控

论文摘要

背景及目的:胃癌是世界上高发的恶性肿瘤之一,也是因肿瘤而死亡的常见原因。然而胃癌细胞本身对治疗的抵抗或者在反复治疗的情况下引起的获得性耐受是临床治疗的重大障碍。因此寻求一种新的切合患者需要的治疗手段就显得十分重要。肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）是通过促凋亡的死亡受体TRAIL-R1,-R2使肿瘤细胞凋亡,而对正常细胞无影响,作为一种新的抗癌制剂引起人们的广泛关注,目前已进入临床试验阶段。然而,并非所有的胃癌细胞系都对TRAIL敏感。为了优化治疗方案,使之适应于个体患者,很有必要深入了解TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的途径。本研究旨在探讨TRAIL诱导胃腺癌细胞凋亡的通路,以及可能引起胃腺癌细胞对TRAIL抵抗的机制。方法:PI染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率;广谱caspase抑制剂（zVAD-fmk）、caspase-8抑制剂（z-IETD-fmk）、caspase-9抑制剂（z-LEHD-fmk）于TRAIL作用前加入,了解其对凋亡的抑制作用;Western blot检测TRAIL诱导的Pro-caspase-3, -8, -9的活化和Bid,PARP的裂解;JC-1染色、流式细胞仪检测线粒体膜电位（Δψm）的变化;Western blot检测Bcl-2家族蛋白中的Bcl-2,Bcl-XL和Mcl-1的水平;流式细胞仪检测细胞膜表面TRAIL-R1,-R2,-R3,-R4表达水平;Western blot检测TRAIL作用前后XIAP及Survivin的表达。结果:TRAIL诱导胃腺癌细胞凋亡具有剂量依赖性和时间依赖性;BGC-823比SGC-7901对之更敏感;TRAIL （100μg/L）处理24 h的凋亡率分别是59.9 %和24.3 %,三种caspase抑制剂都能几乎完全阻止TRAIL诱导的凋亡;TRAIL作用早期即发生caspase-3,-9活化和PARP裂解;线粒体膜电位（Δψm）随TRAIL处理时间延长而不断下降;抗凋亡蛋白Mcl-1在TRAIL作用后24 h下调,而Bcl-2和Bcl-XL在TRAIL处理前后并无变化;BGC-823细胞膜上死亡受体TRAIL-R1、-R2表达水平分别是97.87 %和99.42 %,而在SGC-7901细胞表面分别是7.03 %和95.31%,诱骗受体TRAIL -R3、-R4在两株细胞膜上都很少表达;在这两株都表达死亡受体的敏感和不敏感细胞株中TRAIL引起caspase-8和Bid裂解相同;TRAIL处理后XIAP在敏感细胞BGC-823中下调,而在抵抗细胞SGC-7901中无变化,Survivin在两株细胞中处理前后均无变化。结论:TRAIL能诱导胃腺癌细胞凋亡,且这种凋亡依赖于caspase;除死亡受体途径外,线粒体途径也参与了凋亡信号通路;胃腺癌细胞对TRAIL的敏感性可能与细胞表面死亡受体,尤其是TRAIL-R1的表达水平有关;TRAIL诱导胃腺癌细胞凋亡可能在活化的caspase-3水平受调控,XIAP能保护胃腺癌细胞免于凋亡。

论文目录

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• 参考文献