猪胶原基真皮支架组织相容性的实验研究

论文摘要

目的通过对一种新型的猪胶原基真皮支架（PCDM）的组织超微结构进行观察并对其细胞毒性进行检测,为这种新型生物材料的实验及临床安全应用提供依据。通过将新型猪胶原基真皮支架进行动物皮下埋植,观察成纤维细胞、血管内皮细胞在真皮支架中的生长情况以及真皮支架的血管化情况,探讨改良异种真皮替代物,提高其组织相容性的方法。方法1)通过HE染色、免疫组织化学染色和扫描电镜观察猪胶原基真皮支架（PCDM）的组织结构并与异体脱细胞真皮（HADM）和猪脱细胞真皮（PADM）的组织结构相比较。2)制取不同浓度的PCDM浸提液,设阳性对照,阴性对照与空白对照,以L-929细胞为检测细胞。绘制不同接种浓度时本实验室L-929细胞的标准生长曲线,确定合适的细胞接种浓度,用MTT法检测真皮支架不同浓度的浸提液对细胞增殖的影响情况,按医用生物材料细胞毒性分级标准进行评级。3)将24只wistar大鼠根据其皮下埋植不同的真皮替代物分为PCDM组和HADM组,于埋植后3、7、14、30天分别取出组织,行移植物大体观察,采用HE染色,CD34、Ⅷ因子免疫组织化学染色、观察成纤维细胞、血管内皮细胞在真皮基质的分布增殖状况、血管化过程及组织学变化。结果1)组织学观察:光镜下PCDM表皮已完全去除,真皮内未见细胞成分、血管、毛囊和皮脂腺等皮肤附件,胶原基质的三维结构保持完整。乳头层面光滑完整,免疫组织化学染色见上有一层极薄线形的棕黄色的染区,提示基底膜完整,其下为与基底膜平行、规则排列的胶原纤维,乳头层胶原排列相对致密;网状层表面较粗糙,可见断裂的胶原纤维的残端,胶原束较乳头层粗大、疏松。扫描电镜显示PADM和PCDM的胶原纤维排列致密有序,结构与HADM极为类似,但猪真皮的胶原纤维较人真皮排列更为紧密,提示猪真皮内的胶原纤维含量大于人真皮内的胶原纤维含量。横断面扫描电镜显示:PCDM胶原束排列比PADM疏松类似于HADM。2)在接种细胞数量定为5×103/孔和1×104/孔时,一周内L929生长曲线可以看出细胞量与代谢增殖率间呈正直线相关,细胞活力佳,测量所得数据较为稳定,最适宜进行PCDM细胞毒性的测定。采用标准的细胞毒性检测方法检测PCDM,其细胞增殖度与空白对照及阴性对照无显著性差异,明显优于阳性对照组,细胞毒级评分为0～1,可认为PCDM无明显的细胞毒性。3)埋植实验大体观察:术后各组大鼠创口周围皮肤无明显红肿及炎症反应,切口愈合良好,移植物与创面接触紧密。组织学观察:皮下埋植3天时,各组均见到成纤维细胞（fibroblast,FB）侵入,中性粒细胞、淋巴细胞及少量巨噬细胞浸润。各移植物与周围组织连接处可见开始增生的细小新生毛细血管芽,各组间差异无统计学意义（P＞0.05）;7天时,炎性细胞较3天时减少,各组移植皮内可见大量FB侵入、增生,沿胶原原纤维方向分布;新生毛细血管向移植物内部延伸。术后14天各组移植物与受床周围组织界限清楚,组织内炎性细胞进一步减少,成纤维细胞浸润和血管内皮细胞（vascular endothelial cell,VEC）增生,新形成的毛细血管已达移植物内部,数量进一步增多,且较3天、7天时成熟,差异有统计学意义（P＜0.05）;30天时,血管分布到移植物内各处,成纤维细胞、血管内皮细胞进一步成熟,但数量没有明显增加,差异无统计学意义（P＞0.05）,基本见不到炎性细胞。结论1)经过多种物理化学方法处理的这种猪胶原基真皮支架是一种无毒、安全的新型的天然异种真皮支架。2)FB、VEC在猪胶原基真皮支架上增殖良好,并且可见细胞迁入支架内部,新生血管成熟,说明猪胶原基真皮支架具有良好的组织相容性,不存在异种抗原阻碍成纤维细胞、血管内皮细胞的迁入,是一种良好的天然真皮替代物。

论文目录

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• 符号说明
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 附表
• 附图
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