A型链球菌FasA/B/C蛋白的原核表达及其功能的初步研究

论文摘要

A型链球菌（Group A Streptococci，GAS）又称为化脓性链球菌，是链球菌中致病力最强的菌群，其主要致病物质是外毒素，包括致热外毒素和溶血素等。链球菌的治疗目前临床上多采用联合使用抗生素的办法，但因链球菌的抗药性问题不能解决，因而治疗效果不好。研究表明，fas（fibronectin／fibrinogen binding／haemolytic activity／streptokinase regulatorl）操纵子是GAS中的两元件信号转导系统，由两部分组成：二个组氨酸蛋白激酶（FasB，FasC）和一个反应调节因子（FasA）。在fas操纵子的下游有一个短的非编码的RNA分子（fasX），是fas系统调控毒力因子表达的主要效应因子。本研究选择了fas操纵子中的三个关键蛋白FasB，FasC和FasA为主要研究对象，融合表达了FasB，FasC的胞内区，利用不同的表达载体表达了FasA和融合蛋白NusA-FasA，制备了FasA的抗体，并尝试用不同的方法检测FasB／FasC能否与FasA发生直接的相互作用。与此同时，根据文献报道的fasX可能的启动子区序列，我们设计了特异的引物序列，利用凝胶阻滞的技术方法检测FasA能否直接调控fasX的启动子区。实验结果显示，FasB／FasC与FasA并不能直接的相互作用，FasA对于文献报道的fasX可能的启动子区没有直接的调控作用。我们的工作结果推测在FasB／C和FasA之间可能存在着一种关联分子介导磷酸基团的传递。同时FasA可能通过间接的作用来调控fasX,从而影响GAS外毒素的表达。本研究在抗链球菌感染研究上进行了摸索和探讨，GAS的fas操纵子的研究还处于初始阶段，目前在这方面仍有大量工作有待完成。我们为深入研究fas操纵子做了一些基础工作，相信人们今后在此方面的研究必将获得许多重大突破。

论文目录

• 缩略语
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 FasA/B/C蛋白的原核表达及纯化
• 1.FasA、FasB、FasC蛋白基因钓取及表达纯化
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 1.3 实验结果
• 2.FasA蛋白及FasB/FasC胞内区的融合表达及蛋白的纯化
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 2.3 实验结果
• 3.小结及讨论
• 第二部分 体外生化的方法研究FasA与其他组分之间的相互作用
• 1.FasA与FasB、FasC之间相互作用的分析
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 1.3 实验方法
• 2.检验融合蛋白NusA-FasA能否直接调控fasX的启动子区
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 2.3 实验结果
• 3.小结及讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 致谢
• 附录 硕士期间已发表的论文