动物蜱形态学鉴定核糖体及线粒体DNA多态性研究

论文摘要

本文对动物蜱进行初步的形态学鉴定,与DNA多态性的研究,旨在阐明蜱种内与种间的遗传变异,为进一步的分子遗传学和分子诊断学研究奠定基础。分子遗传学研究采用PCR扩增、克隆、测序和序列分析等方法对采集的蜱的核糖体DNA的内转录间隔区（ITS）序列与线粒体DNA的细胞色素c氧化酶第I亚基（cox1）序列的多态性进行探讨。结果：1.初步形态学鉴定出2科5属共8种蜱,分别为消色牛蜱Boophilus decoloratus、丽色扇头蜱Rhipicephalus pulchellus、褐黄血蜱Haemaphysalis flava、微小牛蜱Boophilus microplus、血红扇头蜱Rhipicephalus sanguineus、拉合尔钝缘蜱Ornithodoros Lahorensis、璃眼蜱属Hyalomma和花蜱属Amblyomma,并首次对斑马消色牛蜱与丽色扇头蜱进行形态学描述,各类蜱u文献所报道的差异分别可能源于地理株的不同,吸血阶段的不同,宿主的不同以及时代的不同；2.首次用PCR方法对5种动物的六种蜱进行ITS-1及ITS-2序列的扩增与序列分析,实验测序结果与GenBank所收录的蜱的ITS-1及ITS-2序列比较,发现它们之间存有一定差异。3.首次对这6种蜱的cox1序列进行PCR扩增,并与GenBank收录的多种蜱的cox1序列进行差异性分析,种间碱基差异在0%～21%之间。本研究证明了ITS-1、ITS-2及cox1三段序列为适宜于蜱遗传变异分析的分子标记,其研究结果有助于了解蜱的生活史、流行病学、物种遗传关系,且有利于相关疾病的诊断。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 1. PCR及其相关方法
• 1.1 一般PCR
• 1.2 限制性片段的长度多态性（RFLP）
• 1.3 聚合酶链式反应连接的限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）
• 1.4 随机扩增多态性DNA技术（RAPD）
• 1.5 DNA序列分析
• 2. 基因突变检测方法
• 2.1 单链构象多态性分析（SSCP）
• 2.2 单核苷酸多态性（SNP）
• 2.3 表达序列标签（EST）
• 3. 研究中所用特定DNA序列的选取
• 3.1 ITS（internal transcribed spacer）内转录间隔区
• 3.2 mtDNA-线粒体DNA
• 4. 本实验的研究目的与意义
• 第一章 动物蜱形态学鉴定
• 1. 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 蜱
• 1.2 鉴定方法
• 2. 结果
• 2.1 鉴定品种
• 2.2 各类蜱的形态特点
• 2.2.1 消色牛蜱（Boophilus decoloratus）
• 2.2.2 丽色扇头蜱（Rhipicephalus pulchellus）
• 2.2.3 微小牛蜱（Boophilus microplus）
• 2.2.4 褐黄血蜱（Haemaphysalis flava）
• 2.2.5 璃眼蜱属（Hyalomma）
• 2.2.6 花蜱属（Amblyomma）
• 2.2.7 未定种蜱
• 3. 讨论
• 第二章 动物蜱rDNA ITS序列多态性的研究
• 1. 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 蜱样品
• 1.1.2 工程菌
• 1.1.3 载体
• 1.1.4 酶类及试剂
• 1.2 方法
• 1.2.1 虫体的处理和DNA提取
• 1.2.2 蜱rDNA ITS片段的扩增
• 1.2.2.1 引物
• 1.2.2.2 PCR扩增
• 1.2.2.3 琼脂糖电泳分析
• 1.2.3 PCR扩增产物回收纯化
• 1.2.4 代表性蜱样品的rDNA ITS-1、ITS-2片段的序列测定
• 1.2.5 DNA序列分析
• 2 结果与分析
• 2.1 PCR扩增结果
• 2.3 测序结果与分析
• 2.3.1 ITS-1基因序列片段的测序结果
• 2.3.2 ITS-1测序结果分析
• 2.3.3 ITS-1序列差异性分析
• 2.3.4 ITS-1序列分析结果
• 2.3.5 ITS-2测序结果分析
• 2.3.6 ITS-2序列差异性分析
• 2.3.7 ITS-2序列分析结果
• 3. 讨论
• 第三章 动物蜱线粒体pcox1基因多态性分析
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 蜱样品
• 1.1.2 工程菌
• 1.1.3 主要试剂
• 1.2 方法
• 1.2.1 虫体的处理和DNA提取
• 1.2.2 蜱mtDNA cox1片断的PCR扩增
• 1.2.3 PCR扩增产物回收与纯化
• 1.2.4 蜱样品的cox1基因片段的序列测定
• 1.2.5 DNA序列分析
• 2 结果与分析
• 2.1 PCR扩增结果
• 2.2 测序结果及分析
• 2.2.1 cox1基因片段的测序结果
• 2.2.2 测序结果分析
• 2.2.3 cox1序列差异性分析
• 2.2.4 序列相似性分析及遗传关系分析
• 3. 讨论
• 全文结论
• 参考文献
• 附图1 质粒pGEM-T easy基因图谱
• 附图2 核糖体DNA重复序列
• 致谢
• 作者简介