HPV16E7及HLA-DQB1基因多态性与新疆维吾尔族宫颈癌关系研究

论文摘要

目的：研究新疆维吾尔族妇女HPV16阳性子宫颈癌组织HPV16E7基因突变情况及子宫颈癌细胞表面HLA-DQB 1基因多态性与新疆维吾尔族妇女子宫颈癌关系。方法：（1）采用聚合酶链反应（Polymerase chain reaction, PCR）方法对160例（子宫颈癌组80例,宫颈炎组80例）新疆维吾尔族妇女宫颈组织标本进行HPV16 E7基因扩增,电泳PCR产物确定扩增产物是否为E7片段,回收PCR产物并进行碱基测序。（2）采用反向膜杂交技术对80例宫颈鳞癌组织标本进行HPV分型。（3）运用聚合酶链反应-直接测序分型（Polymerase chain reaction-Sequencing Based Typing, PCR-SBT）扩增宫颈鳞癌及宫颈炎组织中HLA-DQB 1第二外显子,回收扩增产物并进行碱基序列测定分型。结果：（1）54例宫颈鳞癌中共有6例发生HPV16 E7碱基突变,突变位点为：A647G（2/54）,T760C （2/54）,G663A （1/54）,G666A （1/54）,C790T （1/54）,T846C （1/54）,其中A647G（2/54）及C790T（1/54）为错义突变,分别导致第29位氨基由天冬酰胺变为丝氨酸及第77位氨基由精氨酸变为半胱氨酸。宫颈炎组中有2例HPV16 E7 PCR扩增阳性,测序未发现突变。（2）160个样本中共检测出296个等位基因,其中杂合的等位基因型136人份,纯合的等位基因型24人份。经过频率计算和统计分析发现HLA-DQB1*0325 （OR:10.60,1.341-83.81） HLA-DQB1*0332（OR:12.59,2.909-54.526）在新疆维吾尔族妇女宫颈鳞癌中频率明显高于宫颈炎对照组（p<0.05）,而HLA-DQB 1*0317（OR:0.49,0.304-0.798）和HLA-DQB 1*040302 （OR:0.40,0.243-0.658）明显低于宫颈炎对照组（p<0.05）。（3）在80例宫颈鳞癌分型检测中,共检出15种高危型HPV（分别为HPV16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,68,53,73）,2种低危型HPV（分别为HPV11,42）,其中HPV16单一感染33例,占44%；HPV16合并其他高危型感染20例,占26%,合并高危型感染的型别中以56型为主,占14例（70%）,其次为33型、58型；HPV16合并其他低危型感染7例。80例子宫颈癌中有HPV16型感染的为62例,感染率为77.5%。在混合感染中以双重感染为多,其次为三重感染,发现1例为五重感染。结论：（1）新疆维吾尔族妇女子宫颈癌中HPV感染以HPV16感染率最高,其次为HPV56,而HPV18型较少,且重复感染相对较多,与我国其他地区以HPV16、18型为主有差异,这为HPV疫苗在新疆维吾尔族聚集地区的开发提供一定的理论依据。（2）新疆维吾尔族妇女子宫颈癌HPV16 E7相对于我国其他地区、民族子宫颈癌具有高度保守性,这可能是导致新疆维吾尔族聚集区子宫颈癌高发的重要原因之一。（3）HLA-DQB 1*0325和HLA-DQB1*0332可能是新疆维吾尔族妇女子宫颈癌的易感基因,而HLA-DQB1*0317和HLA-DQB1*040302可能为新疆维吾尔族妇女子宫颈癌的保护基因。（4）HPV16 E7变异位点未发现DQ2抗原结合位点突变,这说明可能E7的变异并不是导致HLA抗原提呈能力下降的原因,某些HLA等位基因频率的升高和降低可能导致了HLA抗原提呈能力下降,这可能是新疆维吾尔族妇女子宫颈癌高发重要原因之一。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 英文缩略词表
• 前言
• 材料与方法
• 1 材料
• 1.1 材料收集
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要仪器设备
• 2. 方法
• 2.1 实验标本留取
• 2.2 组织DNA提取
• 2.3 聚合酶链反应
• 2.4 PCR产物回收送生物公司测序
• 2.5 人乳头瘤病毒（HPV）基因分型
• 3 数据处理
• 结果
• 1. 年龄分布
• 2. 病理学组织学特点
• 3. 宫颈组织中HPV16 DNA检测
• 4. 宫颈组织中HPV16 E7 PCR检测及其碱基序列测定
• 5. 宫颈组织中HLA-DQB1 PCR扩增及其碱基序列测定
• 6. 宫颈组织中HPV感染型别分布情况
• 讨论
• 1 人乳头瘤病毒（HPV）与子宫颈癌
• 1.1 HPV E7与子宫颈癌
• 1.2 HPV基因型与子宫颈癌
• 2. 人白细胞抗原与子宫颈癌
• 2.1 HLA-DQB1各等位基因与子宫颈癌
• 2.2 HLA多态性与HPV的关系
• 2.3 HLA-DQB1等位基因在新疆维吾尔族妇女中分布情况
• 3. HLA及HPV与子宫颈癌的关系
• 结论
• 参考文献
• 文献综述
• 参考文献
• 致谢
• 作者简历
• 石河子大学硕士研究生学位论文导师评阅表