复方中药内两种主要活性成分的单克隆抗体测定法的建立

复方中药内两种主要活性成分的单克隆抗体测定法的建立

论文摘要

通过杂交瘤技术制备中药主要生物活性成分的单克隆抗体,利用单克隆抗体对中药成分进行测定等应用研究,是一种很有意义的研究中药的方法。这种方法拥有免疫反应的高特异性、高灵敏度、方便快捷等优点。本研究将复方中药“芍药甘草汤”中主要成分芍药苷和甘草酸分别与蛋白载体连接,制成人工抗原。将合成的抗原免疫Balb/c小鼠,然后以杂交瘤技术制备单克隆抗体,并通过小鼠腹水大量生产抗体。得到的单抗经初步鉴定,证明其具有高效价、高敏感性以及高特异性。利用这两种单克隆抗体建立了竞争性ELISA方法,获得了以芍药苷和甘草酸浓度梯度和各自的反应OD值拟合出标准曲线和回归方程式。在此基础上,实施了对目前国内市场上流通的10种中成药提取液中的芍药苷和甘草酸的含量的实际检测,并比照相应的HPLC检测结果,以验证以单克隆抗体为基础的免疫检测法的准确性和可行性。测定结果显示,经ELISA检测的结果和HPLC的检测结果非常一致,绝大多数相对误差率在±5%之间。这说明应用单抗结合ELISA技术对中药成分进行定性定量检测的方法是可行的。可以期待的是,本研究结果对目前普遍进行的中成药主要生物活性成分含量的HPLC检测方法将是一种有益的补充和验证,并且在中药现代化的研究中具有明显的特点和优点。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 前言
  • 1 复方中药的历史和现代化
  • 2 复方中药有效成分的提取技术
  • 3 复方中药有效成分的分离纯化和检测
  • 4 芍药甘草汤及其临床应用
  • 4.1 芍药甘草汤研究现状
  • 4.2 芍药和甘草的主要生物活性成分
  • 5 单克隆抗体及其应用
  • 5.1 单克隆抗体种类简介
  • 5.2 单克隆抗体的若干应用
  • 5.3 单抗技术在中药现代化研究中的应用
  • 第二章 实验部分
  • 第一节 芍药苷和甘草酸单克隆抗体的制备
  • 1 实验材料
  • 2 实验方法
  • 3. 结果与分析
  • 第二节 GA和PF单克隆抗体在中成药分析中的应用研究
  • 1 实验材料
  • 2 实验方法
  • 3 结果与分析
  • 总结
  • 参考文献
  • 致谢
  • 附录
  • 相关论文文献

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