论文摘要
替诺福韦为核苷类药物,具有较强抗HIV,HBV活性。为提高替诺福韦的疗效,降低肾毒性,本课题采用一种新颖的方法制备替诺福韦脂质体,以掩盖其负电性,提高生物利用度。迄今为止,国内外尚未见到有关替诺福韦脂质复合物的研究报道。在课题中,我们采用薄膜水合法制备空白脂质体,用挤压法控制粒径。缓慢滴加适量乙醇,随后滴加替诺福韦溶液,共孵育后透析除去乙醇。建立了高效液相测定脂质体及水相溶液中替诺福韦含量的方法,用Sephadex凝胶柱过滤法分离替诺福韦脂质体和游离替诺福韦,测定包封率。此法简便、选择性强、重现性好。以包封率为主要指标,对不同处方和制备方法进行评价。对影响包封率较大的因素进行单因素分析,筛选出最佳处方为药脂比0.03,脂质处方DSPC:CHOL:DMTAP: Cerebrosides: DSPE-PEG（6:3:2:1:0.5,摩尔比）,包封率为86.05±2.20%。用PCS仪测定粒径分布及表面电位,其平均粒径为278.4±67.6nm,多分散系数为0.117-0.350,Zeta电位为31±5mv。脂质体在4℃H EPES缓冲体系保存稳定性超过五周。进一步地,我们尝试在脂质体处方中加入半乳糖基及PEG修饰的脂质,以SMMC7721细胞为模型,研究脂质体处方对肝实质细胞摄取替诺福韦的促进作用。建立了液相质谱联用检测细胞样品中替诺福韦含量的方法,方法灵敏度高,快速。结果表明,修饰的脂质体处方较游离药物进入肝细胞的浓度明显提高,且时间延长,说明替诺福韦脂质体具有一定的长循环性和靶向性。用MTT法考察细胞毒性,当替诺福韦脂质体浓度在20μg/mL下时无明显毒性。以HepG2.2.15细胞为模型,初步考察替诺福韦脂质体抑制HBV的作用。用ELISA法考察培养液及细胞中的HBsAg浓度。结果表明,替诺福韦脂质体能较好抑制HBsAg表达,与拉米夫定对照组比较,效果优于对照组或相当。