NSCLC p53蛋白表达与对铂类化疗反应的Meta分析及rAd-p53增强顺铂对NSCLC细胞敏感性的实验研究

论文摘要

正文:肺癌是当前肿瘤死亡的首要病因,其中非小细胞肺癌（nonsmall-cell lung cancer,NSCLC）约占肺癌总数的80%。大多数NSCLC确诊时已是中晚期,因此治疗以全身化药为主。目前公认的一线化疗方案均以顺铂（cisplatin,DDP）或卡铂为基础联合其他细胞毒性药物,但总体疗效欠佳。p53基因是重要的肿瘤抑制基因,在肿瘤的发生发展中具有重要作用,45%-75%的NSCLC可检测到p53改变。本研究旨在明确p53蛋白表达与NSCLC对铂类药物反应性的关系,以及外源性p53基因联合DDP对NSCLC细胞体外抑制作用的最佳时序,并探讨rAd-p53增加NSCLC细胞对DDP敏感性的机理。检索有关p53蛋白表达和NSCLC对铂类药物化疗反应性关系的文献,提取并记录相关结果,运用Meta分析的方法,对这些结果进行了综合定量评价。纳入16篇文献共1070例患者,p53阳性患者539例,p53阳性率50.4%;铂类化疗有效患者414例,化疗反应率38.7%。其中,531例p53阴性患者铂类化疗反应率44.4%,539例p53阳性患者化疗反应率33%。随机效应模型分析,总体OR值1.37,95%CI（0.84-2.24）,p=0.21。该结果表明,p53蛋白阴性患者可能对铂类化疗更加敏感,但就目前的研究结果尚不能证实在统计学上显著优于p53阳性患者。以肺腺癌A549、GLC-82细胞和肺巨细胞癌95D细胞为研究对象,以rAd-p53不同时序联合DDP进行干预,通过MTT检测,研究rAd-p53联合DDP对NSCLC细胞的杀伤作用。结果表明,rAd-p53对三种NSCLC细胞均有显著的抑制作用。在低于20%抑制率的感染强度下,rAd-p53即可与DDP发挥协同抑制作用,其联合抑制率显著高于相同剂量下各单药的抑制率。rAd-p53无论与DDP同时作用,或是在DDP之前或之后加入,均有相加或协同抑制作用,而以先加入rAd-p53作用48h后再加入DDP协同抑制效应最强。通过流式细胞和基因芯片检测技术,研究了rAd-p53处理后肺癌细胞的周期、凋亡率和肿瘤相关基因的表达变化。结果显示,rAd-p53和DDP联合作用于肺腺癌A549细胞与DDP单独作用比较,两药联合可明显减少增殖期细胞数量,增加肿瘤细胞凋亡。其机制与导入外源性p53基因后,p53基因表达上调并引起调控细胞周期、细胞增殖、细胞凋亡的CDKN1A、FAS、BAK1、TP53I3、TNFSF14、BTG2、MAD2L1、CCND1等一系列基因的表达变化有关。本研究结果表明,p53蛋白表达阴性可能对铂类化疗更加敏感,但就目前研究结果尚不能证实显著优于p53阳性患者;rAd-p53具有显著的抑制NSCLC细胞生长作用,与DDP联合具有协同作用,以先加入rAd-p53作用48h后再加入DDP协同效应最强;rAd-p53导入NSCLC细胞并上调p53基因表达后,通过改变包括细胞周期、细胞增殖、细胞凋亡等一系列基因的表达,可引起细胞周期阻滞和凋亡增加,从而显著提高DDP对NSCLC细胞的敏感性和杀伤效率。

论文目录

• 目录
• 缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 正文:NSCLC p53蛋白表达与对铂类化疗反应的Meta分析及rAd-p53增强顺铂对NSCLC细胞敏感性的实验研究
• 前言
• 第一部分 NSCLC患者p53蛋白表达与铂类化疗反应性关系的Meta分析
• 材料和方法
• 1.文献检索
• 2.文献剔除标准
• 3.文献纳入标准
• 4.资料提取和质量评价
• 5.统计分析方法
• 结果
• 1.纳入研究的描述
• 2.合并疗效分析
• 3.敏感性分析
• 3.1 按中国发表和非中国发表进行亚组分析
• 3.2 以不同的p53阳性标准进行亚组分析
• 4.漏斗图对发表偏倚的分析
• 讨论
• 参考文献
• 第二部分 rAd-p53联合DDP对NSCLC细胞的抑制作用研究
• 材料和方法
• 1.材料
• 1.1 主要仪器设备
• 1.2 主要药品及试剂
• 1.3 主要溶液的配制
• 1.4 细胞株
• 2.方法
• 2.1 rAd-p53滴度测定
• 2.2 细胞复苏、传代、冻存和计数
• 2.3 MTT检测
• 2.4 实验分组及加药
• 2.5 药物联合作用分析
• 2.6 统计学分析
• 结果
• 1.DDP对A549、6LC-8和95D细胞的剂量-抑制效应
• 2.rAd-p53对A549、GLC-82和95D细胞的剂量-抑制效应
• 3.梯度感染强度rAd-p53联合DDP对A549细胞的抑制作用
• 4.梯度感染强度rAd-p53联合DDP对6LC-82细胞的抑制作用
• 5.rAd-p53不同时序联合DDP对A549细胞的抑制作用
• 6.rAd-p53不同时序联合DDP对GLC-82细胞的抑制作用
• 7.rAd-p53不同时序联合DDP对95D细胞的抑制作用
• 讨论
• 参考文献
• 第三部分:rAd-p53增强NSCLC细胞对铂类敏感性的机制研究
• 材料和方法
• 1.材料
• 1.1 主要仪器设备
• 1.2 主要药品及试剂
• 2.方法
• 2.1 细胞周期样品的制备及周期检测
• 2.2 细胞凋亡样品的制备及凋亡检测
• 2.3 基因芯片样品的制备及检测
• 2.4 实时荧光定量PCR对基因芯片结果的验证
• 2.5 统计学分析
• 结果
• 1.rAd-p53联合顺铂对肺腺癌A549细胞周期的影响
• 2.rAd-p53联合顺铂对肺腺癌A549细胞凋亡的影响
• 3.细胞总RNA提取质量鉴定结果
• 4.基因芯片扫描结果
• 5.实时荧光定量PCR验证
• 讨论
• 1.rAd-p53联合DDP对肺腺癌A549细胞周期和凋亡的影响
• 1.1 rAd-p53联合DDP对肺腺癌A549细胞周期的影响
• 1.2 rAd-p53联合DDP对肺腺癌A549细胞凋亡的影响
• 2.rAd-p53联合DDP对肺腺癌A549细胞基因表达的影响
• 2.1 CDKN1A和CCND1基因在细胞周期阻滞中的作用
• 2.2 FAS、TNFSF14、BAK1和TP53I3基因在细胞凋亡中的作用
• 2.3 TP53对细胞增殖相关基因的影响
• 2.4 p53-mdm2的负反馈调节
• 参考文献
• 结论
• 论文附图
• 文献综述
• 攻读学位期间发表文章情况
• 致谢