论文摘要
目的:建立后天感染鸭乙型肝炎病毒（DHBV）福州麻鸭模型,制备原代鸭肝细胞,以DHBV DNA和cccDNA TaqMan荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测法,观察青蒿琥酯（Artesunate,ART）在体内对DHBV DNA和DHBV cccDNA及其在原代鸭肝细胞中对DHBV DNA的抑制作用,并对其可能的作用机制进行初步探讨。方法:（1）筛选1日龄DHBV DNA（-）雏鸭,经颈静脉途径接种DHBV DNA强阳性血清,建立福州麻鸭后天感染乙型肝炎动物模型;将DHBV阳性麻鸭随机分为空白对照组、青蒿琥酯大、中、小剂量组和拉米夫定组,分别给予相应药物进行干预。用药前、用药第7、14、21、28d及停药第7d,取静脉血用实时荧光定量PCR法检测血清DHBV DNA含量。停药7天后取肝组织以UNIQ-10柱式基因组DNA提取法提取肝组织内DNA和cccDNA,并用实时荧光定量PCR法检测。（2）建立一种简单易行的原代鸭肝细胞分离培养方法,分离雏鸭肝细胞（50万/ml）于37℃、5%CO2条件下培养24h存活后,随机分为空白对照、干扰素（IFN）α-2b组和ART实验组,ART组分为15、30、60μg/ml 3个剂量浓度,每48h换药1次,连续加药6d,观察细胞形态和存活情况,8d后收集细胞并测定DHBV DNA的含量。结果:（1）拉米夫定组于用药后,血清DHBV DNA水平迅速降低,停药后立即反跳。青蒿琥酯大剂量组第21、28天DHBV DNA抑制率与拉米夫定组相似,停药后仍有一定的抑制作用。中、小剂量组与空白对照组比较有一定的病毒抑制作用。（2）实验组15、30、60μg/ml 3种浓度ART对DHBV DNA均有明显的抑制作用,浓度越大抑制作用越明显。3种浓度ART对鸭肝细胞无毒性,各药物组细胞存活率均在95%以上。结论:所建原代鸭肝细胞分离培养方法简单易行,TaqMan荧光定量PCR检测方法是一种灵敏度高、特异性强的DNA定量检测技术。ART在麻鸭体内和原代鸭肝细胞中对DHBV DNA均具有抑制作用,且存在量效关系。一定剂量的ART对鸭肝组织无明显毒性、安全、经济,但其抗鸭乙肝病毒的作用机制仍需要进一步的研究。