论文摘要
目的: 从体内动物实验和体外培养细胞实验两个方面,系统观察补肾益精类中药方剂石斛散对视网膜变性动物变性过程的干预作用及视网膜神经细胞损伤的保护,深入分析其在感光细胞凋亡过程中的作用靶点及程度,旨在从不同角度探求中药治疗视网膜色素变性的效果与机制,为临床用药提供客观依据和指导,同时也为今后研究中药防治视网膜变性类疾病提供新的思路和方法。 方法: 1 体内动物实验研究:以先天性视网膜变性rds小鼠作为动物模型,采用组织病理学技术(光、电镜)、原位末端转移酶标记(TUNEL)和视网膜电图(ERG)方法观察石斛散作用后视网膜组织形态、超微结构、感光细胞凋亡以及视网膜功能的变化。用real-time荧光定量PCR的方法研究石斛散治疗rds小鼠后各时间点凋亡相关基因bax、bcl-2、Caspase-3和c-fos的变化。 2 体外培养细胞研究:体外培养的人视网膜神经细胞,采用MTT法分析石斛散及各单味中药对细胞活性的影响。用流式细胞仪观察石斛散对视网膜细胞凋亡的保护作用。采用激光共聚焦扫描显微镜(Confocal)技术,分别以罗丹明123和Fluo3/AM为荧光探针,分析石斛散对谷氨酸损伤前后细胞线粒体膜电位(MMP)及胞内钙变化的影响。 结果: 1 石斛散对视网膜色素变性动物模型rds鼠的干预作用的研究 ① 石斛散治疗rds小鼠光镜结果:14天时对照组视网膜发育较完善,感光细胞有10~
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