衔接蛋白beta亚单位不同剪切体的克隆与鉴定

衔接蛋白beta亚单位不同剪切体的克隆与鉴定

论文摘要

衔接蛋白2(adaptin protein 2,Ap2)是披网格蛋白小泡(clathrin-coated vesicles,CCVS)的重要组成部分,在蛋白质通过细胞膜进入胞质的转运过程中发挥着重要作用。我们通过人类睾丸cDNA芯片的方法将成人和6月龄的胚胎睾丸进行杂交比较,克隆了一个衔接蛋白2β(Ap2β)亚单位的不同剪接体-Ap2β-NY。芯片杂交结果显示,Ap2β-NY在成人睾丸中mRNA的表达量是胚胎睾丸的3.62倍。对Ap2β-NY基因进行测序,获得全长序列并输入GenBank,登录号为AY341427。生物学软件分析表明,全长为3457bp的Ap2β-NY基因编码了一个具有880个氨基酸的蛋白质,预测此蛋白质的分子量为98.12KDa,等电点PI为5.01,定位于人17号染色体上的q11.2-q12。对预测蛋白进行生物信息学分析发现,Ap2β-NY具有Ap2β的全部三个结构域,即具有一个Ap2β氮末端结构域,一个低度重复序列和一个Ap2β炭末端结构域。但是Ap2β-NY的氮末端结构域比Ap2β短了57个氨基酸残基,并且这57个氨基酸残基是疏水性的,很有可能位于蛋白质的表面,是蛋白质相互作用的结合位点。用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)的方法检测成人和胚胎睾丸Ap2β-NY的表达状况,证实了芯片杂交结果。同时精子RT-PCR表明Ap2β-NY在精子中也高表达。用Southern杂交的方法检测Ap2β-NY在16种正常人体组织中的表达情况,发现Ap2β-NY高表达于脾脏、胸腺、前列腺、卵

论文目录

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  • 材料、方法和结果
  • 实验材料
  • 实验方法
  • 实验结果
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  • 综述
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