条带免疫检测法用于HIV感染临床确证的效果评价

论文摘要

背景和目的:艾滋病（AIDS）是因感染人类免疫缺陷病毒（HIV）引起的严重传染病,自1981年首次被发现以来,以难以遏制的速度在全球持续蔓延。目前,虽有预防性疫苗的研发进入临床试验阶段,但由于（HIV）的高度遗传变异性,其前景尚不乐观。因此方便、快速、高效的HIV诊断技术是控制艾滋病流行的重要手段。实验室检测HIV感染的方法很多,根据卫生部2004年颁布的《全国艾滋病检测技术规范》,HIV抗体检测作为筛查HIV病毒携带者的主要检测手段。检测分为初筛、复检和确证三个步骤,确证试剂通常采用免疫印迹（WB）法。确证试剂制备的技术难度高,质量要求严格,国内外仅有少数企业生产,市场价格比较高。而且WB法本身也存在一些缺陷:如制备工艺存在生物安全性问题;用于临床检测时非特异性反应多、背景高;对检测人员的技术要求比较高。条带免疫印迹（LIA）法是WB法的一种改进方法。其原理是用基因工程重组蛋白或合成多肽替代WB法所用的病原体提取物,作为诊断试剂的抗原,经蛋白喷点三维平台包被于固相载体上。通过调配各抗原组分上样浓度,可以提高各组分对抗体的检测能力。本课题改良这种技术用于确证HIV感染,并以国内目前最常用的HIV WB法抗体确证试剂作为参比试剂,从试剂检测水平（灵敏度、特异度、窗口期、检测限等）、可操作性、生产成本等方面进行综合评价。材料与方法:制备LIA法试剂所用的抗原由浙江澳亚生物工程研究院构建表达,包括HIV中国流行株特异性重组抗原gp41、gp120、p17、p24、p55、p31、HIV-2 gp36等。固相载体选择Pall公司生产的硝酸纤维素膜。参比试剂选用杭州澳亚生物技术有限公司生产的人类免疫缺陷病毒抗体确证试剂盒（WB法）。评价样本分别为HIV抗体确证试剂国家参考血清、BBI公司HIV抗体阳转血清盘、公司自制HIV抗体检测限质控血清盘。临床评价样本由中国性病艾滋病预防控制中心国家参比实验室等4家单位采集。初步建立LIA法确证试剂的制备方法和检测方法,检测上述样本,统计检测结果,计算试剂的灵敏度、特异性等评价数据。通过生产工艺设计、成本核算,评价LIA法试剂盒批量生产的可行性;通过访问试验人员,了解其对LIA法用于临床检验的认可度,主要包括操作是否较WB法方便、结果是否较WB法易判等。结果:检测27份国家参考血清,结果12份阴性参考品均为阴性反应,10份HIV阳性参考品均为阳性反应,5份不确定参考品结果无阴性反应。用LIA法和WB法分别检测HIV抗体阳转血清盘,LIA法在第33天可以检测到针对gp41的抗体,优于WB法。用LIA法和WB法分别检测HIV抗体检测限质控血清盘,LIA法可判定1:40000稀释比的血清,优于WB法。临床检验结果LIA法确证试剂盒的灵敏度为100%、特异度为98.3%,而WB法检测的灵敏度为98.8%、特异度为93.9%。gp41和p24在检测中出现频次较高,可以作为HIV阳性的主要判断标准。HBV感染者比其他人群更容易检测出不确定结果。结论在本次评价中,LIA法各项指标达到或超过WB法水平,而且生产成本更低,操作性更强,有望替代WB法成为HIV感染的确证试剂。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• 英文摘要
• 目次
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 3 结果
• 3.1 国家参考血清评价结果
• 3.2 窗口期检测效果评价
• 3.3 抗体检测限评价
• 3.4 真实性评价（临床试验）
• 3.5 生产成本及可操作性评价
• 4 讨论
• 4.1 国家参考血清评价结果
• 4.2 窗口期检测效果
• 4.3 真实性评价结果
• 4.4 生产和使用方面
• 5 结论
• 参考文献
• 综述
• 作者简历及在学期间所取得的科研成果