论文摘要
目的:探讨槲皮素对野生型hkv1.5及其突变体I502A离子通道作用及其鉴定其作用位点.方法:将hkv1.5通道(野生型,突变型)基因表达在非洲爪蟾卵母细胞膜上,使用双微电极电压钳技术记录这两种通道的离子流并用槲皮素进行干预.结果:槲皮素呈电压,浓度,时间依赖性的激活野生型hkv1.5通道,同时也加快了通道的激活和失活进程。然而,相同剂量的槲皮素没有改变突变型I502A离子通道的激活和失活动力学特性。另外,0.3 mmol/L的过氧化氢同样激活了野生型hkv1.5通道,过氧化氢作用细胞后,再在细胞外液中分别加入两种天然的抗氧化剂—100μmol/L槲皮素和4μmol/L丹参酮IIA,发现丹参酮IIA能够完全解除过氧化氢对通道的激活作用,而槲皮素却没有改变过氧化氢的这一作用。结论:(1)槲皮素激活了野生型hkv1.5通道而且明显增强其离子流;(2)hkv1.5离子通道S6结构域的I502残基的突变解除了槲皮素的激活作用,故可推测S6结构域的脂肪族中性氨基酸I502是槲皮素激活野生型hkv1.5通道的重要作用位点; (3)槲皮素对通道的激活作用并不是其经典的抗氧化作用机制的体现。
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摘要Abstract第一部分 槲皮素作用于 S6 跨膜结构域的 I502 氨基酸残基激活野生型 hkv1.5 离子通道前言材料和方法一、材料1.1 实验动物1.2 实验试剂1.3 溶液配制1.4 实验仪器二、方法2.1 hkv1.5 在非洲爪蟾卵母细胞上表达2.1.1 hkv1.5 通道基因的体外转录2.1.2 卵母细胞制备和hkv1.5 cRNA 的注射2.2 电生理记录2.3 药物2.4 数据分析实验结果1. 槲皮素电压依赖性的激活野生型hKv1.5 通道,而对突变型 I502A 通道没有作用2. 槲皮素浓度时间依赖性的激活野生型hKv1.5 通道3. 槲皮素对野生型hKv1.5 通道的激活作用没有状态依赖性4. 槲皮素激活野生型hkv1.5 通道不是通过其经典的抗氧机制起作用的讨论结论第二部分 Quercetin activates wild type hKv1.5 channel expressed in Xenopus oocytes by a residue I502 in S6 transmembrane DomainAbstract1. Introduction2. Materials and Method2.1 Animals2.2 In vitro transcription and functional expression in Xenopus oocytes2.3 Electrophysiology recording3. Reagent4. Data analysis5. Results5.1 Voltage-dependent activation of WT hKv1.5 channel but not to I502A channel by quercetin5.2 Concentration and time- dependent enhancement of WT hkv1.5 currents by quercetin5.3 Absence of use-dependent activation of WT hkv1.5 current by quercetin5.4 Quercetin-induced changes in WT hkv1.5 properties may be foreign to itself anti-oxidative action6. Discussion7. Conclution8. AcknowlegementsReferences第三部分 综述摘要Abstract1. 电压依赖性钾离子通道的分子结构2. 超速延迟整流钾通道的分子生物学基础和生物学特征3. Kv1.5 通道的药理学特性4. Kv1.5 通道阻滞剂的临床应用5. Kv1.5 通道的调节6. Kv1.5通道在病理状态下的变化及其意义7. Af 发病8.房颤的病因及发病机制9.房颤的治疗现状10.结语参考文献致谢
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槲皮素作用于S6跨膜结构域的I502氨基酸残基激活野生型hkv1.5离子通道
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