肝细胞生长因子联合骨髓单个核细胞移植促进小鼠急性损伤肝脏再生

论文摘要

骨髓单个核细胞（bone marrow mononuclear cells, BMMCs）移植能够促进组织或器官的再生及损伤的修复,特别是在急性损伤肝脏的再生及修复方面可以发挥良好的治疗作用；但是,在临床实践中这种治疗潜能需要进一步提高,才能够使BMMCs移植治疗肝脏疾病得以发挥更加重要的作用。肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor, HGF）在肝细胞的发育过程中发挥了重要作用。在相关动物模型的研究中已经证实：HGF能够减轻肝脏的纤维化。为了探索联合应用HGF及BMMCs移植是否能够促进损伤肝脏的再生,我们进行了此项实验研究。在本实验中,我们采用了经典的四氯化碳腹腔注射的方法构建了Balb/c小鼠急性肝脏损伤模型,然后将构建好的急性肝脏损伤模型小鼠作为受体组随机分为四组,即：①BMMCs+HGF组：急性肝脏损伤模型小鼠尾静脉输注经PKH26荧光染料预先标记的BMMC（5x106 cells/mice）,同时腹腔注射HGF（50ng/kg.d×7 d）;②MMCs组：急性肝脏损伤模型小鼠仅经尾静脉输注PKH26荧光染料预先标记的BMMC（5×106 cells/mice）;③HGF组：急性肝脏损伤模型小鼠仅给予腹腔注射HGF （50 ng/kg.d×7d）;④对照组：急性肝脏损伤模型小鼠仅给予腹腔注射0.9%生理盐水（0.3ml/d×7 d）。将同批次健康的Balb/c小鼠作为供体组。无菌操作下采用密度梯度离心的方法分离提取BMMCs,经PKH26荧光染料标记后移植给受体组。然后,在移植前后的第0、1、2、3及4周分别进行免疫组织化学检测及免疫荧光检测来判断肝脏组织形态学变化；通过检测血清生化指标来观察肝脏功能恢复情况；进而分析应用HGF与BMMCs移植在肝脏损伤修复过程中能否起到“叠加”作用。实验结果表明：经PKH26预标记的BMMCs能够在受体组的肝脏中检测到,而且这些移植的细胞能够同时表达核增殖抗原及白蛋白。经体示学的方法比较证实了,BMMCs+HGF组小鼠肝脏的核增殖抗原及白蛋白的表达均较其它3组明显增加。血清肝功能检测证实,BMMCs+HGF组小鼠血清ALT及AST在移植后的不同时间点均较对照组明显好转。单因素方差分析结果表明P<0.05,统计学上具有显著性差异。本研究创新点主要是发现应用HGF联合BMMCs移植能够促进小鼠急性损伤肝脏再生及修复。

论文目录

• 内容提要
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 第1章 前言
• 第2章 文献综述
• 2.1 HGF的发现以及它在细胞生物学、生命科学及临床医学中的应用
• 2.1.1 HGF做为肝营养因子而被发现
• 2.1.2 HGF在肝脏再生过程中的肝营养作用
• 2.1.3 HGF在其它器官再生过程中的作用
• 2.1.4 HGF的生理作用
• 2.1.5 HGF在器官发育过程中与间充质上皮细胞间的相互作用
• 2.1.6 HGF-c-Met系统在器官发生病变时所发挥的作用
• 2.1.7 总结与展望
• 2.2 骨髓干细胞与肝脏疾病
• 2.2.1 在正常生理状态下,BMMSC并不能够促进肝实质细胞的再生
• 2.2.2 骨髓细胞对肝非实质细胞具有重要作用
• 2.2.3 BMSC治疗肝脏疾病的可行性研究
• 2.2.4 总结
• 第3章 实验研究
• 3.1 材料和方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 实验动物
• 3.1.3 实验分组
• 3.1.4 移植细胞的获取及染色
• 3.1.5 移植细胞的流式细胞仪分析鉴定
• 3.1.6 Balb/c小鼠急性肝脏损伤模型的构建
• 3.1.7 免疫组织化学检测的组织切片准备
• 3.1.8 组织学和形态学检测
• 3.1.9 PKH26预标记的PCNA阳性/白蛋白阳性表达BMMCs的鉴定
• 3.1.10 血清转氨酶活力检测
• 3.1.11 统计学分析
• 3.2 结果
• 3.2.1 来源于供体组的BMMC流式细胞仪鉴定结果
• 3.2.2 四氯化碳诱导构建Balb/c小鼠急性肝脏损伤模型的验证
• 3.2.3 定植于受体组肝脏组织中BMMCs的鉴定
• 3.2.4 BMMC在受体组肝脏组织中潜在增殖能力的鉴定
• 3.2.5 BMMCs在受体组肝脏组织中向"肝样细胞"分化能力的鉴定
• 3.2.6 BMMCs移植后肝脏功能的恢复情况
• 3.3 讨论
• 第4章 结论
• 参考文献
• 作者简介及攻读学位期间取得的科研成果
• 致谢