论文摘要
黄檗（Phellodendron amurense Rupr.）属芸香科阔叶乔木,是我国东北阔叶红松林的重要伴生树种,也是东北著名的三大硬阔之一,为珍贵的药用植物和用材树种。由于不合理的药材资源采收和过度采伐,黄檗这一野生资源已处于濒危状态。丛枝菌根（arbuscular mycohizal, AM）真菌是自然界中普遍存在的一种寡营养活体微生物,能与绝大多数陆生植物根系形成共生体。AM真菌能够提高植物对营养元素的吸收,促进植物生长,改善植物对干旱及毒性污染的耐受性,增强植物的抗病性等。目前,关于黄檗AM真菌的研究仍处于起步阶段,而黄檗AM真菌的鉴定及菌群结构分析国内外尚无人问津,我们开展本项研究,拟采用分子生物学方法鉴定和分析黄檗AM真菌及菌群结构,因此,本项研究不仅对丰富和发展群落生态学具有重要的理论意义,而且对于收集、保护及利用AM真菌微生物资源,为黄檗菌根功能菌群的研究奠定了基础。从东北林业大学林场采集黄檗根系及根际土壤,采用碱解离-酸性品红染色法对黄檗根系进行染色,湿筛倾析-蔗糖离心法分离黄檗根际土壤AM真菌孢子。采用形态学和分子生物学方法对分离得到的AM真菌孢子进行分类鉴定,并应用Nested-PCR技术检测根际土壤AM真菌侵染黄檗根系情况。依据AM真菌孢子形态特征及25S rDNA D1/D2区域序列分析鉴定出黄檗根际土壤中存在4种AM真菌:根内球囊霉（Glomus intraradices）,摩西球囊霉（Glomus mosseae）,美丽盾孢囊霉（Scutellospora calospora）和变形球囊霉（Glomus versiforme）,而应用Nested-PCR技术从黄檗根内只检测到了G. intraradices,G. mosseae和Scu. calospora,表明G. versiforme未侵染黄檗根系。同时,采用Nested-PCR技术扩增黄檗菌根及根际土壤AM真菌18S rDNA NS31/Glol区域,利用该产物优化AM真菌DGGE条件,并结合测序、系统发育分析及DGGE图谱分析技术对黄檗AM真菌菌群结构进行分析。结果表明,Nested-PCR技术具有较高的灵敏性,可有效的从微量DNA中扩增出约230bp的目的片段;AM真菌最佳DGGE条件为:凝胶变性梯度范围30%-60%,纯化后的PCR产物作为DGGE上样样品,丙烯酰胺浓度8.0%,电泳电压130V,电泳时间8h,电泳温度60℃;DGGE条带测序及图谱分析表明,2种样品具有不同的DGGE指纹图谱特征,DGGE带谱在条带的数量、亮度、优势度等方面均存在较大差异;全部序列可分为3类菌群,即球囊霉属、盾孢囊霉属和植物病原微生物,其中Glomus sp. （EF177624）和Glomus sp. （DQ085205）分别为黄檗根系和根际土壤样品中最具优势的AM真菌。
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标签：黄檗论文; 丛枝菌根真菌论文; 鉴定论文; 变性梯度凝胶电泳论文; 菌群结构分析论文;