论文摘要
目的：探讨蒿甲醚（Artemether）联合热疗诱导体外培养人舌鳞癌Tca8113细胞的凋亡作用并初步探讨其机制。方法：（1）实验分组：对照组（Tca8113细胞）、药物组（150μM、300μM、450μM、600μM、750μM、900μM、1050μM蒿甲醚处理Tca8113细胞）、加热组（43℃40min、43℃80min、43℃120min加热处理Tca8113细胞）、药热联合组（150μM、300μM、450μM、600μM、750μM、900μM、1050μM蒿甲醚+43℃40min、43℃80min、43℃120min加热处理Tca8113细胞）。（2）采用倒置显微镜观察各组细胞的形态学变化。（3）采用MTT比色法检测各组细胞的增殖抑制率。（4）采用流式细胞仪TUNEL法检测各组细胞的凋亡率。（5）采用Caspase-3活性检测试剂盒,酶标仪检测法检测各组细胞单位重量蛋白中所含的Caspase-3酶活力单位。（6）采用线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）,流式细胞仪（FCM）检测各组细胞线粒体膜电位的变化情况。（7）采用免疫细胞化学染色分析各组细胞Bcl-2及Bax的表达情况。（8）采用SPSS 11.5统计软件进行统计分析。结果：（1）倒置显微镜下观察对照组、药物组（300μM蒿甲醚）、加热组（43℃80min）、药热联合组（300μM蒿甲醚+43℃80min）细胞处理后24h的形态学改变：经过蒿甲醚或／和加热处理后,Tca8113细胞变圆、皱缩,出现凋亡细胞。药热联合组与药物组、加热组相比较,凋亡细胞数量明显增加。（2）MTT比色法检测各组细胞处理36h后的增殖抑制率分别为：药物组（150μM蒿甲醚）为（8.64±4.61）%、药物组（300μM蒿甲醚）为（19.22±5.42）%、药物组（450μM蒿甲醚）为（33.16±5.03）%、药物组（600μM蒿甲醚）为（43.28±3.97）%、药物组（750μM蒿甲醚）为（60.17±6.92）%、药物组（900μM蒿甲醚）为（76.78±3.65）%、药物组（1050μM蒿甲醚）为（87.30±1.63）%、加热组（43℃80min）为（22.68±3.93）%、药热联合组（150μM蒿甲醚+43℃80min）为（33.54±4.40）%、药热联合组（300gM蒿甲醚+43℃80min）为（72.95±3.99）%、药热联合组（450μM蒿甲醚+43℃80min）为（90.86±2.41）%、药热联合组（600μM蒿甲醚+43℃80min）为（91.55±2.64）%、药热联合组（750μM蒿甲醚+43℃80min）为（92.03±2.13）%、药热联合组（900gM蒿甲醚+43℃80min）为（92.87±2.02）%、药热联合组（1050μM蒿甲醚+43℃80min）为（93.65±1.76）%。（3）流式细胞仪TUNEL法检测各组细胞处理36h后的凋亡率分别为：对照组为（2.97±1.20）%、药物组（300 u M蒿甲醚）为（9.40±1.80）%、加热组（43℃40min）为（15.10±2.79）%、加热组（43℃80min）为（32.23±4.37）%、加热组（43℃120min）为（49.57±3.20）%、药热联合组（300μM蒿甲醚+43℃40min）为（31.17±1.97）%、药热联合组（300μM蒿甲醚+43℃80min）为（56.27±4.37）%、药热联合组（300μM蒿甲醚+43℃120min）为（84.23±3.23）%。（4）酶标仪检测法检测各组细胞处理16h后,单位重量蛋白中所含的Caspase-3酶活力单位分别为：对照组（0.04±0.01）、药物组（300μM蒿甲醚）为（0.12±0.01）、加热组（43℃80min）为（0.27±0.01）、药热联合组（300μM蒿甲醚+43℃80min）为（0.49±0.03）。（5）流式细胞仪（FCM）检测各组细胞处理24h后的JC-1单体（monomer）含量分别为：对照组（14.57±1.60）%、药物组（300μM蒿甲醚）为（20.37±1.25）%、加热组（43℃80min）为（28.40±0.50）%、药热联合组（300μM蒿甲醚+43℃80min）为（60.93±0.51）%。（6）免疫细胞化学染色法分析各组细胞处理6h后Bax和Bcl-2的表达结果为：经过蒿甲醚或/和加热处理后,Tca8113细胞Bax表达增强,Bcl-2表达减弱；药热联合组与药物组、加热组相比较,Bax和Bcl-2表达改变最为显著。结论：加热和/或蒿甲醚均可以抑制人舌鳞癌Tca8113细胞的增殖,诱导其凋亡,二者具有协同和增敏作用。