论文摘要
本研究利用基因拼接方法获得了人分泌型klotho（hskl）基因,构建了hskl 基因的克隆载体pBS-hskl 和表达载体pcDNA3.1/Zeo（+）-hskl。通过阳离子聚合物转染CHO 细胞,建立了稳定表达hskl 基因的细胞株CHO-hsKL。应用hskl 基因的特异性引物对CHO-hsKL 细胞株的基因组DNA 进行PCR 鉴定,结果表明hskl 基因已整合到转染细胞的基因组中。利用SDS-PAGE（银染色）和Western blot 检测冻干法浓缩的细胞培养上清,结果显示在稳定转染细胞株CHO-hsKL 的培养上清中存在相对分子量约为66kDa 的hsKL 蛋白。本实验首次成功获得了天然结构的重组hsKL 蛋白,为进一步研究hKL 蛋白的生物学功能奠定了基础。
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