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拟南芥赤霉素受体基因克隆和转化研究

2020-12-06阅读(426)

拟南芥赤霉素受体基因克隆和转化研究

论文摘要

目前已发现的调控植物开花过程的分子遗传学途径主要有四个:春化途径、光周期途径、自主开花途径与赤霉素途径。赤霉素信号转导途径控制着一系列的生长发育过程,调控开花时间是其重要功能之一。目前已有相关报道表明各个信号转导途径间可能存在复杂的对话机制,进而影响植物的发育与开花时间。为了进一步研究赤霉素信号转导与其它开花途径之间的相互作用及对开花时间的影响,我们克隆了赤霉素三个受体基因,并构建了与HA融合的超表达载体。本研究得到的转基因材料为进一步研究拟南芥中赤霉素信号转导途径与其它信号途径间的对话机制提供了基础。本实验从植株中提取总RNA,经逆转录合成cDNA第一条链,再以cDNA第一条链为模板,通过PCR技术扩增目的基因。同时我们利用Gateway克隆系统,将目的基因导入入门载体,经过测序鉴定得到正确的目的基因片段,再通过特异性重组将目的基因克隆到表达载体PK2GW7-HA中。通过农杆菌（Agrobacterium tumefacieus）转化哥伦比亚野生型拟南芥植株中。通过抗性培养基筛选获得纯合的株系,再利用荧光定量PCR技术筛选表达水平高的株系。通过与野生型表型观察比较,发现转基因植株叶偏淡绿,节间较长。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 第一章 前言
  • 1 赤霉素研究进展
  • 1.1 赤霉素生物合成途径
  • 1.2 赤霉素生物合成途径的调控
  • 2 赤霉素信号转导研究进展
  • 2.1 GA反应突变体
  • 2.2 GA反应途径的主要组分
  • 2.3 GA信号转导模式
  • 3 赤霉素受体GID1的研究进展
  • 4 DELLA蛋白
  • 4.1 DELLA家族蛋白的保守结构域
  • 4.2 DELLA蛋白在GA信号通道中的分子机制
  • 4.3 DELLA蛋白与植物的生长发育
  • 5 本研究的目的及意义
  • 第二章 材料与方法
  • 1 材料
  • 1.1 植物材料
  • 1.2 菌种与质粒
  • 1.3 引物
  • 1.4 主要试剂
  • 1.5 培养基
  • 1.6 常用溶液
  • 2 方法
  • 2.1 Columbia WT植株总DNA的提取
  • 2.2 转基因拟南芥35S::FT植株总RNA提取
  • 2.3 总RNA反转录成cDNA第一条连
  • 2.4 目的片段的PCR扩增
  • 2.5 BP反应
  • 2.6 LR反应
  • 2.7 双元载体的农杆菌转化
  • 2.8 拟南芥花粉管通道法转化哥伦比亚野生型植株
  • 2.9 阳性植株的筛选
  • 2.10 超表达转基因植株荧光定量PCR检测
  • 2.11 转基因植株表型分析
  • 2.12 阳性植株对ABA抗性实验
  • 第三章 结果与分析
  • 1 重组质粒测序结果
  • 1.1 pDONR201-GID1a以质粒测序结果
  • 1.2 pDONR 201-GID1b（含有内含子）质粒测序结果
  • 1.3pDONR 201-GID1c质粒测序结果
  • 1.4 重组质粒pDONR201-GID1b定点突变结果
  • 2 双元载体农杆菌菌落PCR电泳结果
  • 2.1 PK2GW7-HA-GID1a PCR电泳结果
  • 2.2 PK2GW7-HA-GID1b PCR电泳结果
  • 2.3 PK2GW7-HA-GID1c PCR电泳结果
  • 3 阳性植株T2代单插植株筛选结果
  • 3.1 PK2GW7-HA-GID1a筛选结果
  • 3.2 PK2GW7-HA-GID1b筛选结果
  • 3.3 PK2GW7-HA-GID1c筛选结果
  • 4 实时荧光定量PCR的检测结果
  • 4.1 PK2GW7-HA-GID1a检测结果
  • 4.2 PK2GW7-HA-GID1b检测结果
  • 4.3 PK2GW7-HA-GID1c检测结果
  • 5 转基因植株与columbia野生型植株表型比较
  • 6 转基因植株与columbia野生型植株对ABA抗性实验结果
  • 第四章 讨论与小结
  • 1 野生型与转基因拟南芥的表型分析
  • 2 野生型与转基因拟南芥对ABA抗性实验结果
  • 3 小结
  • 参考文献
  • 致谢

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