长角血蜱和嗜群血蜱ITS-2、COI和COII基因的序列分析研究

论文摘要

蜱隶属于节肢动物门Arthropoda,蛛形纲Arachnida,蜱螨亚纲Acari,寄螨目Parasitiformes,蜱总科Ixodoidea,是陆生脊椎动物的专性、非永久性体外寄生虫。它分布广泛,主要侵袭哺乳类、鸟类、爬行类,甚至两栖类动物。蜱除直接侵袭人和动物外,它还是人和动物多种重要疾病（包括真菌、病毒、立克次氏体、螺旋体、细菌和原虫）的传播媒介。本试验应用聚合酶链式反应（PCR）技术从长角血蜱和嗜群血蜱总DNA中扩增得到核糖体第二内部转录间隔区基因（ITS-2）、线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ（CoⅠ）和线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅱ（COⅡ）,并将其分别克隆得到的长角血蜱和嗜群血蜱的ITS-2基因、COⅠ和COⅡ基因进行了序列测定与分析,并结合GenBank已登录的相关序列,进行了分子系统学研究,从分子水平上探讨了长角血蜱和嗜群血蜱的分类与进化关系。将三组基因序列进行了比较分析,结果表明:本文测定的长角血蜱的ITS-2基因与澳大利亚所测定的长角血蜱ITS-2核苷酸同源性为99.4%,而与嗜群血蜱的同源性仅为88.3%;基于COⅠ和COⅡ基因,长角血蜱和嗜群血蜱的同源性分别为87.5%和90.4%,长角血蜱与褐黄血蜱（AB075954）的同源性分别为84.2%和94.6%,嗜群血蜱与褐黄血蜱（AB075954）同源性分别为76.8%和88.2%。三个基因的序列分析均表明:长角血蜱和嗜群血蜱是两个不同的种。用距离法和最大简约法构建了三种不同的分子系统树,三种树的拓扑结构均存在较大的相似性。基于ITS-2基因序列,以疥螨属的兔疥螨作为外群,长角血蜱和嗜群血蜱在每种系统树上都聚集在一起,自举值为（100,99,100）。基于COⅠ基因,以瓦螨属的狄氏瓦螨作为外群,在N-J法和MP法构建的系统树中长角血蜱和嗜群血蜱都是聚集在一起,自举值（99,96）;而在UPGMA法构建的系统树中两者距离有所变化,长角血蜱和血红扇头蜱聚集在一起,自举值（69,78）。基于COⅡ基因,以瓦螨属的狄氏瓦螨作为外群,每种系统树上长角血蜱和褐黄血蜱、嗜群血蜱都相聚居,自举值（90,89,60）。实验结果表明长角血蜱和嗜群血蜱是血蜱属中亲缘关系较近的两个有效种。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 1 文献综述
• 1.1 蜱的系统分类学研究进展
• 1.1.1 传统研究方法
• 1.1.2 现代方法
• 1.1.3 全证据方法
• 1.1.4 生物学特性
• 1.2 DNA序列分析在蜱类的研究
• 1.2.1 核糖体DNA的研究
• 1.2.2 线粒体DNA的研究
• 1.3 系统发生关系树的构建方法
• 1.4 展望
• 1.5 本试验研究的目的和意义
• 2 试验材料和方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 虫株来源
• 2.1.2 主要仪器设备
• 2.1.3 主要试剂及载体
• 2.1.4 培养基及常用液体
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 虫体基因组DNA的提取
• 2.2.2 PCR扩增
• 2.2.3 基因的克隆与测序
• 2.2.4 基因同源性分析和系统树构建
• 3 结果
• 3.1 核糖体第二内部转录间隔区ITS-2基因
• 3.1.1 PCR扩增长角血蜱和嗜群血蜱的核糖体ITS-2基因
• 3.1.2 菌落PCR检测
• 3.1.3 数据分析
• 3.1.4 ITS-2基因的系统发生关系
• 3.2 线粒体细胞色素氧化酶I（COI）基因
• 3.2.1 PCR扩增长角血蜱和嗜群血蜱的COI基因
• 3.2.2 菌落PCR
• 3.2.3 数据分析
• 3.2.4 COI基因的系统发生关系
• 3.3 线粒体细胞色素氧化酶II（COII）基因
• 3.3.1 PCR扩增长角血蜱和嗜群血蜱的COII基因
• 3.3.2 菌落PCR
• 3.3.3 数据分析
• 3.3.4 COII基因的系统进化树构建
• 4 讨论与分析
• 4.1 DNA提取
• 4.2 基因的选择
• 4.3 分子系统进化树构建方法
• 4.4 系统树的统计学分析与讨论
• 4.5 不同种蜱间系统发育关系探讨
• 4.5.1 ITS-2序列分析
• 4.5.2 COI基因序列分析
• 4.5.3 COII基因序列分析
• 5 结论
• 6 参考文献
• 致谢