化学发光及共振光散射测定植物多胺的研究

论文摘要

多胺（精胺、亚精胺和腐胺）是生物体内广泛存在的直链脂肪族含氮化合物,在植物的生长发育过程中起着重要作用,直接参与生物体内的多种生理活动,如核酸的复制、转录和翻译、蛋白质的合成以及稳定膜的结构,是生物体生长和细胞代谢所必需的痕量活性物质,生物体内多胺的含量与组织的病变、生长发育的水平有直接的关系。因此发展选择性好、灵敏度高、经济实用的分析多胺的方法一直是人们关注和研究的热点之一。 化学发光分析因为仪器简单、灵敏度高等优点,成为近年来痕量分析十分重要的领域。本文发现精胺与Cu（Ⅱ）离子结合生成的不饱和配合物对Luminol-H2O2化学发光反应具有强烈的催化作用,在一定范围内化学发光强度与精胺的浓度成正比。据此机理,建立了精胺的液相化学发光测定法,该方法具有操作简单,线性范围宽,灵敏度高等优点。在最佳实验条件下,测定精胺的线性范围为:1.0×10-5～1.0×10-7mol/L,检出限为4.0×10-9mol/L,对1.0×10-7mol/L的精胺测定的相对标准偏差（RSD）为5.6%（n=5）。 利用多胺络合溶解Cu（OH）2形成多胺-Cu（Ⅱ）不饱和配合物的方法,建立了固态Cu（OH）2柱测定多胺的流动注射化学发光分析法,与柱后固定化多胺氧化酶化学发光方法比较,本方法具有灵敏度高,分析速度快,操作简单的特点。测定精胺、亚精胺和腐胺的检出限分别为0.17 pmol,0.38 pmol,0.44 pmol,对1.0×10-7mol/L的三种多胺测定的RSD分别为0.64%,1.10%,3.30%,线性范围为:1.0×10-5～1.0×10-7mol/L。 以甲醇-水（体积比为20:80）为流动相,用Symmetry C18反相色谱柱（5 μm,3.9×150mm）分离多胺,利用多胺通过Cu（OH）2柱时会与Cu2+发生配位反应,生成多胺-铜配合物,基于该配合物对Luminol-H2O2化学发光反应的催化作用,建立了高效液相色谱分离化学发光检测测定多胺的新方法。但是虽经多途径条件优化,本文未能将精胺和亚精胺分开,腐胺有较好的分离。所以本方法可用于检测植物中腐胺的含量及精胺和亚精胺的总量,检出限为2 pmol,该方法用于苹果和草莓中多胺的测定,取得了较为满意的结果。 此外,我们还利用共振光散射方法研究了多胺与DNA的相互作用,结果发现精胺与DNA结合后能使共振光散射强度大为增强,其散射峰位于300 nm,并且共振光散射的强度与精胺的浓度呈现良好的线性关系。在测定精胺的线性范围内亚精胺和腐胺不产生干扰,据此建立了选择性测定精胺的新方法,线性范围为:5.0×10-7～1.0×10-5mol/L,检出限为7.4×10-8mol/L,该方法不需要分离就可以直接测定精胺的含量,大大简化了操作过程,缩短了分析时间。该法应用于新几内亚凤仙中精胺的测定,得到满意结果。

论文目录

• 1 引言
• 1.1 高效液相色谱分离多胺的检测方法
• 1.1.1 紫外检测
• 1.1.2 荧光检测
• 1.1.3 化学发光检测
• 1.1.4 电化学检测
• 1.1.5 质谱检测
• 1.2 化学发光法测定多胺的应用前景
• 1.3 多胺与DNA相互作用的研究
• 2 精胺的化学发光液相分析
• 2.1 试验部分
• 2.1.1 试验主要试剂
• 2.1.2 试验主要仪器
• 2.1.3 试验方法
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 铜（Ⅱ）与精胺配合物催化发光动力学特性
• 2.2.2 铜（Ⅱ）与精胺相对浓度对化学发光强度的影响
• 2.2.3 体系条件的优化
• 2.2.3.1 体系pH的影响
• 2.2.3.2 发光试剂浓度的影响
• 2.2.3.3 反应时间的影响
• 2.2.4 校正曲线和检出限
• 2.3 讨论
• 3 生物多胺的流动注射化学发光分析
• 3.1 试验部分
• 3.1.1 试验主要试剂
• 3.1.2 试验主要仪器
• 3.1.3 试验方法
• 2柱的制备'>3.1.3.1 固态Cu（OH）₂柱的制备
• 3.1.3.2 试验方法
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 体系最佳条件优化
• 3.2.1.1 溶液pH的影响
• 3.2.1.2 缓冲溶液浓度的的选择
• 3.2.1.3 化学发光试剂条件优化
• 3.2.1.4 延迟管长度对化学发光强度的影响
• 3.2.2 多胺的标准曲线
• 3.2.3 精密度与检出限
• 3.3.讨论
• 4 高效液相色谱化学发光检测器测定植物多胺的研究
• 4.1 实验部分
• 4.1.1 试验主要试剂
• 4.1.2 试验主要仪器
• 4.1.3 试验方法
• 4.2.结果与分析
• 4.2.1 流动相的选择
• 4.2.2 发光试剂的PH值对发光强度的影响
• 2O₂浓度比例的影响'>4.2.3 Luminol浓度及与H₂O₂浓度比例的影响
• 2固体柱的制备及其体积的影响'>4.2.4 Cu（OH）₂固体柱的制备及其体积的影响
• 4.2.5 延迟管长度对化学发光信号的影响
• 4.2.6 多胺的标准曲线
• 4.2.7 测定的精密度与检出限
• 4.2.8 多胺的色谱图
• 4.2.9 样品中多胺含量的测定
• 4.3 讨论
• 5 多胺与DNA相互作用的研究
• 5.1 试验部分
• 5.1.1 试验主要试剂
• 5.1.2 试验主要仪器
• 5.1.3 试验方法
• 5.2 试验结果
• 5.2.1 多胺与DNA的相互作用
• 5.2.2 多胺与DNA作用的共振光散射光谱
• 5.2.3 精胺与DNA作用的紫外和荧光光谱
• 5.2.4 缓冲溶液pH值对体系光散射强度的影响
• 5.2.5 FsDNA浓度对光散射强度的影响
• 5.2.6 时间对光散射强度的影响
• 5.2.7 NaCl浓度的影响
• 5.2.8 共存物质对测定的干扰
• 5.2.9 线性范围、检出限及实际样品测定
• 5.3 讨论
• 6 结论
• 参考文献
• 在读期间发表的学术论文
• 作者简历
• 致谢
• 附录：
• 鲁米诺化学发光测定精胺
• 鲁米诺化学发光体系应用新进展