论文摘要
目的:根面龋是老年人的口腔常见病,老年患龋率为73.0%,充填率30.6%,且根面龋多于冠面龋。患龋老年人群中只有30%接受治疗,70%未接受治疗。因此,根龋病是老年口腔疾病防治的重要内容之一。在菌斑细菌的作用下,牙骨质表层下无机物脱矿,有机物分解,牙骨质结构和完整性遭到破坏软化成根龋。关于根面龋致病菌的观点至今仍有分歧。对致龋微生物生物学特性的研究结果,提示变形链球菌是最重要的致龋菌,对根面龋的发生起协同作用。早期采用的抗生素、氟化物防龋等在临床应用上有诸多局限性,尚需要探讨一些新的有效的预防方法。蜂胶成分非常复杂。其中,以黄酮类的含量最高,也是蜂胶的精华所在,约占萃取物的40%-50%。人们发现它具有多种药理活性,包括抗氧化活性、抗炎、抗病毒、免疫调节以及抗肿瘤作用。目前蜂胶在治疗口腔粘膜病、防治牙周病中效果明显。蜂胶失活牙髓、消毒牙根管对口腔软硬组织无任何副作用。亦可用于皮肤科、妇科、消化内科等多种疾病的治疗中,适用范围广泛。本文将探讨蜂胶防龋效果及其可能的防龋机制,为蜂胶在预防根面龋临床应用提供实验基础。方法:1菌悬液的制备:将复苏48h的变形链球菌种于羊血培养基微需氧条件下37℃恒温箱培养24h。挑选菌落,传代培养3次,涂片检查细菌生长良好,确定为变形链球菌后将细菌转种于牛心汤培养液中。微需氧环境37℃恒温培养24小时。使用紫外分光光度计用无菌生理盐水调整为OD=1.0的菌悬液用于实验。2蜂胶醇溶液（propolis ’s solution简称:P’s）的制备:将100g/L醇溶性北京蜂胶提取物按1:2的梯度逐级成倍稀释,即制备7.5g/L,3.75g/L,1.875g/L三种浓度蜂胶醇溶液。3体外抑菌实验:采用纸片琼脂扩散法,使用卡尺测量每组试剂周围抑菌环大小。每个试剂组作5份标本。4收集因牙周病导致的Ⅲ度松动磨牙40颗,体视显微镜下观察（放大10倍）无裂痕缺隙,无根面龋坏,刮除牙结石及根面牙周膜。用0.1mol/L PBS液在超声清洗器内清洗5min,干燥,置10%甲醛溶液中消毒4℃冰箱保存备用。所有牙用金刚砂盘从中央窝处沿颊舌向面纵向剖开,以牙冠近（远）中侧作为试验区。从釉牙骨质界下1mm制成7mm×7mm的牙骨质块,去离子水超声清洗12min,吹干试验区中部暴露形成5mm×5mm的实验开窗区。其余部位涂布指甲油。将预备好的牙骨质块随机分成5组（每组15个标本）。开窗区分别用7.5g/L,3.75g/L,1.875g/L三种浓度蜂胶醇溶液以及20g/L氟化钠溶液,去离子水（deionized water简称D’w）浸泡约5min,自然凉放30min后,放回37℃人工唾液恒温水浴,每天3次,每组各于5d、10d、15d随机取出5个标本去离子水冲洗处理4min室温下干燥。将7.5g/L P’s,3.75g/L P’s,1.875g/L P’s,20g/L NaF,D’w处理过的牙标本分别悬吊上述菌液2ml中在微需氧条件下培养48h后取出,脱矿液留作原子吸收分光光度计测Ca2+溶出量。5扫描电子显微镜观察:用高速金刚砂盘喷水条件下将脱矿15d后,7.5g/L P’s处理过的牙标本每个样本于开窗中分切成两半,一半牙骨质块立即放入2.5%戊二醛内预固定24h,1%锇酸内后固定2h。用PBS缓冲液漂洗,50%至无水乙醇逐级脱水干燥后镀金膜,扫描电镜观察标本并拍照。6光镜观察:将剩余脱矿牙标本以4%多聚甲醛溶液固定24h,10%EDTA溶液常规脱钙,以平行牙体长轴为标准做近远中向连续组织切片,行HE染色,观察标本并拍照。结果:（1）随蜂胶浓度降低,抑菌环直径变小。7.5g/L P’s组,3.75g/L P’s组直径分别为15.36±0.60mm,12.40±0.47mm。浓度1.875g/L时,仍有明显抑菌环,与95%乙醇组4.10±0.49mm比较差异有统计学意义。（2）脱矿和钙溶出量测定结果:蜂胶醇各浓度组均有抑制牙骨质脱矿的作用。作用5天的各浓度组与D’w组相比,牙骨质Ca2+溶出量差异均具有高度显著性（P<0.01）,且随着蜂胶浓度的增加脱矿量也随之减少。与氟化钠组相比,除1.875g/L P’s组牙骨质Ca2+溶出量无显著性差异（P>0.05）外,其余各实验组的脱矿作用差异均具有高度显著性（P<0.01）。作用10天各浓度组与D’w组相比,牙骨质脱矿量差异均具有显著性（P<0.01）,且随着蜂胶浓度的增加脱矿量也随之减少。与氟化钠组相比,除1.875g/L P’s组脱矿量差异有显著性（P<0.05）外,其余各组对牙骨质的脱矿作用差异均具有高度显著性（P<0.01）。作用15天的各浓度组与D’w组及氟化钠组相比,Ca2+溶出量差异均具有高度显著性（P<0.01）。相同浓度蜂胶作用时间越长脱矿量越少。（3）龋损深度在7.5g/L蜂胶组中最小33.27±10.37μm,空白组中最大116.92±17.94μm。各处理组与空白组间差异具有高度显著性（P<0.01）。蜂胶各浓度组除1.875g/L组与氟化钠组间差异无显著性（P>0.05）,其余各组与氟化钠组有非常显著性差异（P<0.01）。表层厚度各组与对照组间差异均存在显著性差异（P<0.01）。（4）扫描电镜观察:在去离子水组人工龋表面脱矿明显有大小不等的孔穴,呈典型的蜂窝状,牙骨质羟磷灰石晶体溶解基质内含大量细菌。氟化钠组:人工龋表面形态改变类似于去离子组,可见大小不等的孔穴表面下结构紊乱。蜂胶组:蜂胶组脱矿实验后与脱矿实验前相比牙骨质表面形态改变较少。高倍镜下未见明显酸蚀孔或开放的牙本质小管口。（5）光镜下改变各组牙骨质层均出现脱矿区,但病损深度以对照组为重,对照组龋损区域呈一个三角形病变外观,表层很薄,表层下脱矿区域宽。光镜下,可见部分牙本质小管扩张,扩张的小管可排列呈串珠状。部分小管相互融合形成大小不等的坏死灶。周围组织间界限不清。氟化钠组:牙齿表现为表层增厚,表层下脱矿区域变窄,波及牙本质浅层。蜂胶组:表层致密,镜下可见轻微龋损,其脱矿区与正常组织间界限明显。牙本质层基本保持结构完整,镜下可见通于牙本质全层的管状空间和成牙本质细胞突起。结论:（1）蜂胶醇溶液能明显抑制变形链球菌的生长,（2）有抑制牙骨质脱矿的作用,（3）通过微观及超微结构观察,发现蜂胶组与对照组在病理形态学方面存在差异。以上结果表明:蜂胶醇溶液对根面龋的发生有较好的预防作用。