论文摘要
由产肠毒素大肠杆菌引起的仔猪腹泻是一种常见病，在世界范围造成严重的经济损失。而肠毒素大肠杆菌的的致病作用与其具有黏附性菌毛和肠毒素密切相关。ETEC菌株是通过细菌的菌毛与宿主黏膜上皮细胞表面的相应受体结合，从而在该局部组织定居、繁殖和产生毒素，引起小肠黏膜损伤，导致吸收分泌功能失常而致腹泻。本研究对腹泻仔猪粪便中分离出的12株大肠杆菌进行生化鉴定和致病性检测，筛选出了7株有致病性的大肠杆菌。经电子显微镜观察，发现EC308、EC316、EC358和EC369 4株大肠杆菌接种于TSB培养基中，37℃培养48h，连续传代3次，菌毛可以得到良好的表达。试验证明用加热法处理、硫酸铵沉淀的方法，可有效地保证提取菌毛蛋白数量和纯度。用这4株分离菌制备全菌抗血清和菌毛抗血清，进行菌株间血清学交叉试验，发现这4株大肠杆菌的全菌抗原和菌毛抗原之间存在交叉现象，其中菌毛蛋白是这4株大肠杆菌的主要保护性抗原。提取4株菌的菌毛蛋白，经SDS-PAGE检测出各样品蛋白分子量，EC369和EC358菌毛提取物分别有3条蛋白条带，分子量分别为20.0KD、40.5KD、72.0KD和20.0KD、36.4KD和85.6KD；EC316菌毛提取物有4条蛋白条带，分子量分别为20.0KD、38.4KD、45.0KD和66.2KD；EC308菌毛提取物仅有一条分子量为24.0KD的蛋白条带。其中分子量为20.0KD蛋白条带为EC369、EC358和EC316所共有。Western-Blotting试验显示，菌株EC369、EC358及EC316分子量为20KD的蛋白条带和菌株EC308分子量为24KD的蛋白条带均能与各株菌的菌毛抗血清呈现反应条带。因此，结合甘露糖敏感血凝反应（MRHA）的试验结果，可以判断EC308表达的菌毛为K88，EC369、EC358和EC316的表达的菌毛为987P。该试验结果说明，这4株大肠杆菌不同菌毛蛋白间存在共同的抗原表位。