激活Rho激酶对大鼠海马神经元突起生长影响的原子力显微镜观察

论文摘要

目的:了解激活Rho激酶通路后,神经元突起的坍塌过程,细胞膜表面结构的变化,丰富突起形成的形态学资料。材料和方法:体外原代培养大鼠海马神经元,用Rho激酶促进剂LPA干预海马神经元,原子力显微镜观察细胞突起的生长过程和细胞膜表面结构的变化趋势。结果:Neurobasal和B27无血清培养基培养获得的大鼠海马神经元纯度较高,且细胞生长活力旺盛,贴壁后6-11d的细胞适宜用于进行结构和功能等实验观察。随着神经元的发育,细胞突起不断生长,分支逐渐增多,其长度、直径和数量在观察的48小时达到高峰,之后略有下降。原子力显微镜显示出清晰的突起,神经元细胞膜结构丰富,主要包括膜蛋白、孔洞样结构等。在神经元发育的早期可见大量卵石样的膜蛋白嵌于细胞膜上,其表面凸凹不平,随着细胞发育的不断成熟,胞膜逐渐平整,而且出现较多的形状各异的孔洞样结构。用LPA干预后,神经元的突起明显较对照组缩短,而且其数量、长度、直径均变化明显,但是它们的变化趋势与对照组基本相似,均以48小时为主峰。细胞膜的变化主要表现在其不平整性维持相对较长的时间,有较多的膜蛋白富集,但在发育的后期仍出现孔洞样结构,其在数量和形状、大小均有别于对照组。结论:神经元的发育是一个渐进过程,突起不断生长、延伸、分支逐渐增多,膜结构逐渐完善。Rho激酶活性提高可诱导突起坍塌,表现为突起缩短、数目减少。Rho激酶活性增加诱导膜结构发生改变,主要表现为物质转运结构的增多以及膜蛋白质丰富。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 1.1 神经元的发育
• 1.2 Rho激酶在神经元发育中的作用
• 1.5 研究的目的和意义
• 材料和方法
• 2.1材料
• 2.2 方法
• 2.3 原子力显微镜观察步骤
• 2.4 统计学处理
• 结果
• 3.1 大鼠原代培养海马神经元鉴定
• 3.2 大鼠海马神经元的原子力显微镜观察结果
• 讨论
• 4.1 原子力显微镜在神经元发育研究中的应用
• 4.2 神经元突起及细胞膜结构的发育
• 4.3 Rho激酶对神经元突起及膜结构的影响
• 结论
• 参考文献
• 英文缩写词表
• 致谢