论文摘要
[目的]：研究大鼠癫痫发作后海马区Bcl-2和Bax的表达情况，以探讨癫痫与细胞凋亡调控基因之间的关系。[方法]：健康Spague-Dawley（SD）大鼠30只，雄性，体重250-300g，随机分为5组，每组各6只。分别是：空白对照组；红藻氨酸注射6小时组；红藻氨酸注射24小时组；红藻氨酸注射48小时组；假模型组。采用侧脑室内注射红藻氨酸（kainic acid，KA）癫痫模型；空白对照组不接受任何处理因素；假模型组将红藻氨酸溶液换为等体积的人工脑脊液，侧脑室注射。观察动物惊厥行为发作，按照Racine的标准，将符合实验要求的动物用于实验。将各组大鼠灌注取脑，制备标本，冰冻切片。分别行HE染色和免疫组化二步法检测Bcl-2和Bax表达，显微镜下观察并记录海马区神经元形态改变并对凋亡调控基因Bcl-2和Bax的免疫阳性细胞进行细胞计数，每组大鼠取6张组织切片，这些组织切片的冠状断面水平相似，每一脑片随机取6个不重叠视野，求其算术平均值，最后测定结果均以（?）±s表示，用SPSS11.5统计包进行分析。[结果]：红藻氨酸侧脑室注射对大鼠能产生明确的致痫作用，癫痫模型大鼠发作行为表现与Racine分级法的描述完全一致，癫痫的行为变化分段明确。HE染色结果表明：空白对照组、假模型组海马区神经元染色均质，形态正常：红藻氨酸注射6小时组海马区神经元染色均质，细胞体积正常，细胞核形态正常；红藻氨酸注射24小时组和红藻氨酸注射48小时组大鼠海马神经元体积变小，核染色质浓集，胞质致密，嗜酸性染色增强。Bcl-2免疫组化染色结果表明：与空白对照组及假模型组比较，脑室内注射红藻氨酸6小时、24小时、48小时后大鼠海马区免疫阳性细胞都增多，统计学比较有显著性差异（P＜0.05）。脑室内注射红藻氨酸6小时大鼠海马区免疫阳性细胞表达达高峰，脑室内注射红藻氨酸24小时、48小时后大鼠海马区免疫阳性细胞逐渐减少。假模型组和空白对照组比较无差异（P＞0.05）。Bax免疫组化染色结果表明：与空白对照组及假模型组比较，脑室内注射红藻氨酸6小时、24小时、48小时后大鼠海马区免疫阳性细胞逐渐增多，统计学比较有显著性差异（P＜0.05），，假模型组和空白对照组比较无差异（P＞0.05）。与空白对照组及假模型组比较，脑室内注射红藻氨酸6小时组Bcl-2／Bax的比值升高而脑室内注射红藻氨酸24小时、48小时组Bcl-2／Bax的比值逐渐下降（P＜0.05），假模型组和空白对照组比较无差异（P＞0.05）。[结论]：1．红藻氨酸大鼠侧脑室内注射可获得理想的癫痫动物模型。2．癫痫中存在细胞凋亡现象。3．Bcl-2和Bax是癫痫导致的细胞凋亡的调控基因，Bcl-2早期表达升高并高于Bax的表达时，光镜下海马区神经元的形态结构未出现细胞凋亡的特征性改变；随时间的延长，当Bax表达逐渐升高并高于Bcl-2的表达时，海马区神经元出现了明显的细胞凋亡的形态学改变，Bcl-2／Bax的比值改变与癫痫的神经元存亡相关。