柴胡干根药材的分子鉴别及遗传多样性分析

论文摘要

本文首先简要概述了柴胡的研究概况,并从形态学、细胞、生化研究、DNA分子标记等水平概括了柴胡遗传多样性的研究进展,重点阐述了本研究的研究内容、创新点和研究意义。柴胡是我国的传统常用中药,具有重要的药用价值和经济价值。2005版《中华人民共和国药典》记载柴胡的来源为伞形科植物柴胡（Bupleurum Chinese DC.）和狭叶柴胡（Bupleurum scorzonerifolium Willd.）的干燥根。而柴胡各栽培地的种植来源复杂,加之诸多因素导致所产的药材质量良莠不齐,药材鉴别困难,这就给柴胡资源的研究、保存、评价、利用以及新种质的开发等带来很大困难。本文以14个柴胡栽培品干根药材为材料进行RAPD分析。首先优化了RAPD反应体系中模板DNA浓度、引物浓度、dNTP浓度、Taq酶的用量等参数。然后在优化条件下使用筛选出的RAPD特异引物OPD-8对样品进行扩增,得到了RAPD指纹图谱及遗传聚类图。结果可知：当相似性系数为0.930时,各个柴胡样品单独聚为一类,仅使用一条引物就可将供试样品全部区别开来；并获得了优良品种ZQ-T的稳定存在的RAPD特异性标记,记为OPD-82500。接着本文采用了新的数据处理方法,即利用Gene-Snap软件将RAPD图谱中每个泳道的电泳图谱转换为光密度对Rf的曲线。供试样品所具有的曲线分别不同,每个峰代表一个条带。当Rf值为0.365时,只有样品ZQ-T出现了明显的峰,此峰即代表了ZQ-T的特征条带OPD-82500。它可作为重要的分子性状用于快速鉴别该样品,为从分子水平鉴别柴胡干根药材及建立一种新的中药材鉴别方法提供参考。接着本文利用AFLP分子标记技术研究了柴胡不同种、同种不同栽培品间的遗传多样性及亲缘关系,采用筛选出的E-AAC/M-CTA、E-AGG/M-CTG和E-AGG/M-CAA 3对引物构建了14个柴胡干根样品的AFLP指纹图谱。结果表明：14个样品共扩增出106条清晰可辨的条带,其中90条具有多态性,多态性比率为84.91%,多态率最高的引物组合为E-AGG/M-CTG,多态性比率达到86.96%。14个样品间的相似性系数介于0.326-0.848之间,其中7号（LC-L）和8号（LC-T）的相似系数最大,为0.848,它们分别是陵川当地种种于陵川和太谷,说明它们在遗传上具有相对稳定性。并用UPGMA法对14个样品进行了聚类分析,结果表明：相似性系数在0.480时,14个样聚为2大类,10、11号（红柴胡）聚为一类,其余12个样聚为另一类,其中7号和8号最先聚到一起,它们之间的亲缘关系最近。表明了应用AFLP可将北柴胡与红柴胡区分开,该结果与分类学相一致,且红柴胡与其他12个北柴胡栽培种间的遗传相似性系数最小,两者结果相吻合,表明种间差异大于种内差异。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1 柴胡概况
• 1.1 柴胡的种类及分布
• 1.2 柴胡的化学成分及药理研究
• 2 柴胡遗传多样性的研究进展
• 2.1 形态学水平研究
• 2.2 细胞水平研究
• 2.3 生化研究
• 2.4 DNA分子标记研究
• 3 本研究的意义和研究内容
• 参考文献
• 第二章 柴胡干根药材的RAPD分析及鉴别
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 2.1 柴胡干根DNA的提取
• 2.2 RAPD反应体系的建立与优化
• 2.3 RAPD引物的筛选
• 2.4 柴胡干根样品的RAPD分析
• 2.5 特异条带稳定性的检测
• 2.6 数据处理
• 3 讨论
• 3.1 RAPD鉴别中药材的优缺点
• 3.2 RAPD在中药材鉴别中的稳定性和可靠性
• 参考文献
• 第三章 柴胡干根样品的AFLP分析
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 2.1 柴胡干根DNA的提取
• 2.2 限制性内切酶消化
• 2.3 酶切产物的连接与预扩增反应
• 2.4 引物筛选
• 2.5 选择性扩增反应及银染显色
• 2.6 数据处理
• 3 讨论
• 3.1 RAPD标记与AFLP标记在柴胡研究中的比较
• 3.2 影响AFLP分析的主要因素
• 3.3 柴胡DNA指纹图谱的建立
• 参考文献
• 第四章 小结与展望
• 1 小结
• 2 展望
• 附录:本研究所配制的溶液
• 攻读学位期间取得的研究成果
• 致谢
• 个人简况