论文摘要
目的：基于α-鹅膏毒肽（α-amanitin）的作用机制和乙肝病毒复制转录特点，初步探讨α-鹅膏毒肽对HepG2.2.15细胞的毒性及其对乙型肝炎病毒（HBV）复制的影响。方法：采用MTT法检测不同浓度α-鹅膏毒肽对体外培养的HepG2 2.2.15细胞株的毒性，然后在无毒浓度下用不同浓度α-鹅膏毒肽或拉米夫定与HepG2 2.2.15细胞共培养6天，分别在第3天和第6天收集细胞培养上清液，采用时间分辨免疫荧光法（TRFIA）测定上清HBsAg、HBeAg浓度；收获细胞提取总RNA，行逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞内HBsAg和HBcAg mRNA的表达。结果：①在0.0064μg／ml～0.8μg／mlα-鹅膏毒肽时，对HepG22.2.15细胞无明显毒性作用，当浓度达到4μg／ml～20μg／ml时毒性较明显，第3天TC50为10.190μg／ml，第6天TC50为8.471μg／ml；②对上清夜HBsAg的影响：第3天，3TC组、0.8μg／ml组和0.16μg／ml组对HBsAg抑制率分别为46.071％、19.881％和15.952％，其余各组未见抑制作用；第6天前述三组的抑制率分别为55.709％、47.405％和29.296％，均P＜0.01，其余各组抑制作用不明显；③对上清夜HBeAg的影响：第3天3TC组和0.8μg／ml组对HBsAg抑制率分别为31.858％和14.159％，其余各组未见抑制作用；第6天3TC组、0.8μg／ml组、0.16μg／ml组和0.032μg／ml组α-amanitin浓度组对HBeAg抑制率分别59.161％、51.524％、45.845％和29.086％。0.0064μg／mlα-amanitin组抑制作用不明显；④对胞内HBsAg mRNA表达水平的影响：3TC组、0.8μg／ml组、0.16μg／ml组和0.032μg／ml组3个α-amanitin浓度组随浓度的增加，表达逐渐下调，第3天，3TC组、0.8μg／ml组与其他各组比较差异有显著性，第6天，以上四组与对照组相比差异有显著性，其余各组未见明显差异；⑤对胞内HBcAg mRNA表达水平的影响：第3天，3TC组、0.8μg／ml组HBcAg mRNA表达下调，与对照组比较差异有显著性，其余各组未见明显差异；第6天，3TC组、0.8μg／ml组、0.16μg／ml组与对照组相比差异均有显著性。⑥第6天与第3天相比，3TC组、0.8μg／ml组和0.16μg／ml组细胞内HBsAg、HBcAg mRNA表达下调，上清液中HBsAg、HBeAg浓度也随之下降；其中3TC组抑制作用最明显，实验组以0.8μg／ml组最明显。结论：在本实验条件下α-鹅膏毒肽在0.0064μg／ml～0.8μg／ml浓度时对HepG2 2.2.15细胞的毒性较小，低毒浓度下α-鹅膏毒肽可抑制HepG2 2.2.15细胞HBeAg、HBsAg的分泌及HBsAg和HBcAg mRNA的表达。随浓度的增加，抑制作用越明显，说明α-鹅膏毒肽对乙型肝炎病毒复制有一定程度的抑制作用。