人类精子中H-Y抗原mRNA的缺失与精子mRNA功能探讨

论文摘要

作为生殖细胞的人类精子,承担着将男性的遗传物质传递给下一代的重要任务。传统观点认为精子唯一的目的就是传递父本基因组,本身是终末分化细胞,已经关闭基因的转录与表达,但最近有越来越多的研究发现成熟精子中存在有大量而复杂的mRNA群体。本项研究旨在通过在精子mRNA中寻找H-Y抗原mRNA,来探讨精子mRNA的保留机制以及精子mRNA可能执行的功能。本项研究采集健康男性志愿者的精液,通过上游法纯化精子,使用多克隆抗H-Y抗原的IgY抗体和FITC标记的兔抗鸡IgG对精子进行免疫组化和流式细胞仪检测,观察成熟Y精子膜表面是否带有H-Y抗原。为研究成熟精子mRNA是否含有H-Y抗原的mRNA,我们提取精子总RNA,用RT-PCR的方法进行了分析。免疫组化实验显示可在许多精子的头部与尾部的交界处非常清晰地看到H-Y抗原的荧光,通过流式细胞仪检测,被荧光素抗体标记的H-Y抗原阳性精子的比例为49.86%。经RT-PCR分析没有从成熟精子mRNA中得到H-Y抗原mRNA特异的条带。以上结果证实了H-Y抗原存在于Y精子膜表面,但成熟精子mRNA中不含H-Y抗原的mRNA,表明H-Y抗原表达于精子发生的早期阶段,该结果与健康人类精子SAGE表达谱的结果一致。并且H-Y抗原mRNA缺失的现象提示了保留在精子中的mRNA,进入卵母细胞以后会表现至关重要的功能,而非仅仅是精子发生过程中遗留的残存物。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 前言
• 1.1 精子的结构和精子发生的生理学过程
• 1.2 人类成熟精子 mRNA 研究进展
• 1.3 问题的提出
• 2 材料和方法
• 2.1 材料
• 2.2 主要实验仪器
• 2.3 方法
• 3 结果
• 3.1 上游法纯化的精子质量
• 3.2 成熟的Y 精子膜表面表达H-Y 抗原
• 3.3 成熟精子 RNA 中不存在 H-Y 抗原的 mRNA
• 4 讨论
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文