乙醇对肝脏固醇调节原件结合蛋白及其降解机制的研究

论文摘要

背景:我国近年来由酒精所致的肝损害逐年上升,酒精已成为继病毒后导致肝损害的第二大病因。典型的酒精性肝病临床表现为脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纤维化,最终将发展为不可逆性肝硬化。因此酒精性肝病的防治已经成为重要的医疗课题。国内、外关于酒精性肝病的研究日益增多,但研究热点大多集中于酒精本身或其代谢产物对肝细胞的直接毒性作用以及营养失调、脂质代谢异常和脂质过氧化等变化在酒精性肝病发病学中的作用。肝脏脂质代谢紊乱是酒精性脂肪肝的发病基础,固醇调节元件结合蛋白（sterol regulatory element-bindingproteins,SREBPs）可以促进多种脂质合成相关酶类如乙酰CoA羧化酶（acetylCoA carboxylase,ACC）、脂肪酸合成酶（fatty acid synthase,FAS）的基因转录,从而在分子水平调节脂质代谢。SREBPs在酒精性脂肪肝发病机制中的作用尚不完全明确,其降解机制国内外未有报道。本实验通过建立大鼠酒精性脂肪肝模型,研究了SREBPs在大鼠酒精性脂肪肝中表达及乙醇对其降解机制,有望对酒精性脂肪肝的进一步研究及临床治疗开辟新的途径。目的:通过建立大鼠酒精性脂肪肝模型,检测大鼠血清中甘油三酯（Triglycerides,TG）的含量,分析肝脏中SREBP-1c及其靶基因ACC的表达,并进一步探讨乙醇对SREBP-1C降解机制,测定Fbw7αmRNA、蛋白的含量,以及SREBP-1c的磷酸化及乙酰化水平。方法:健康雄性成年Wistar大鼠30只,体重（180±10g）,正常喂养1周后随机分为2组:正常对照组、酒精性脂肪肝模型组（各15只）。模型组给予酒精灌胃,正常对照组予等量生理盐水。12周末处死大鼠,GPO-PAP酶法测定血清TG含量,HE染色观察肝脏病理学改变,PCR或Western blot检测大鼠肝内ACC、SREBP-1c及Fbw7α的表达含量,免疫沉淀分析SREBP-1c的磷酸化及乙酰化水平,并将各项与血清內TG做相关性分析。结果:酒精性脂肪肝大鼠模型组相比对照组,模型组肝脏出现明显脂肪变,TG含量明显升高,SREBP-1c及其靶基因ACC明显上调,Fbw7αmRNA及蛋白水平降低,SREBP-1c磷酸化水平明显低于对照组,但SREBP-1c的乙酰化水平比对照组明显升高。各项与TG做相关性分析,SREBP-1c、ACC、SREBP-1c的乙酰化水平均与TG含量呈正相关,Fbw7α、SREBP-1c磷酸化水平与TG呈负相关。结论:乙醇增加SREBP-1c及其靶基因ACC含量,导致肝脏脂质合成增加,TG蓄积,脂肪肝形成。而且乙醇不仅降低Fbw7αmRNA及蛋白的表达,还通过影响SREBP-1c翻译后修饰如下调磷酸化,上调乙酰化,导致SREBP-1c与Fbw7相互作用减弱,从而使SREBP-1c降解障碍,增加SREBP-1c含量,形成酒精性脂肪肝。

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