大豆异黄酮对大鼠下丘脑—垂体—脾脏ERα、NGF、IL-2、AR表达的影响

论文摘要

目的:本实验研究了大豆异黄酮（SI）对去卵巢大鼠下丘脑—垂体—脾脏内雌激素受体-alpha（ERα）、神经生长因子（NGF）、白细胞介素-2（IL-2）、雄激素受体（AR）蛋白和mRNA表达及分布的影响,探讨ERα、NGF、IL-2和AR在下丘脑、垂体、脾脏中表达的意义及大豆异黄酮对下丘脑—垂体—脾脏中四种物质的影响及其相互作用机制。并通过分离肠道内容物来研究大豆异黄酮对肠道菌群的影响。方法:将50只雌性青年大鼠随机分为假手术组和去卵巢组,去卵巢组分别补充高、中、低、对照（溶剂）剂量大豆异黄酮,补充至2周和6周每组各宰杀5只,运用免疫组织化学SABC法和寡核苷酸探针原位组织杂交方法,对大鼠的下丘脑、垂体、脾脏中ERα、NGF、IL-2、AR的表达和分布变化进行研究,并运用活菌计数法对肠道内容物进行初步研究。结果:①ERα、NGF、IL-2、AR蛋白和mRNA分布于下丘脑的弓状核、背内侧核、腹内侧核、室周核和室旁核,表明ERα、NGF、IL-2、AR在下丘脑发挥了广泛的作用,而四种产物主要定位于细胞胞核和突起,少量存在于胞浆和胞膜中,表明内源性雌激素主要通过经典的核受体途径进行基因转录调控,也有部分通过非基因组机制。去卵巢大鼠下丘脑各核团中ERα、NGF、IL-2、AR的表达强度和阳性神经元数目总趋势是显著降低,而补充SI后四种阳性产物的强度和数目均得到不同程度的回升,其中6H（6周高剂量）组基本恢复到假手术组水平,6L（6周低剂量）组仅有少许回升,6M（6周中剂量）组介于两者之间,2周各剂量组中仅在2H（2周高剂量）组有回升,表明SI可提高体内雌激素水平,进而促进NGF、IL-2、AR的表达,在维持和保护下丘脑神经元的结构和功能中发挥了重要作用,而且这种作用存在时间和剂量的依赖性;另外ERα、NGF、IL-2、AR表达变化的相似性提示四者在SI对下丘脑的作用中是相互协调和联系的。②ERα、NGF、IL-2、AR蛋白和mRNA在垂体前叶、中叶和后叶均有分布,且主要定位于胞核,胞膜和胞浆中很少,表明ERα、NGF、IL-2、AR参与了垂体生理功能的发挥。去卵巢大鼠垂体中ERα、NGF、IL-2、AR的表达强度和阳性细胞数目均显著下降,而且6C（6周去卵巢对照）组比2C（2周去卵巢对照）组下降更多。体外补充SI后,垂体ERα、NGF、IL-2、AR的表达强度和阳性细胞数目均有不同程度升高,其中6H组基本恢复至假手术组的水平,而2周各剂量组和6M、6L组仅有部分恢复或无明显变化,且四者分布和强度的变化趋势一致,表明SI在垂体结构和功能维持上发挥了重要作用,且存在时间和剂量的依赖性,也表明SI在垂体中的作用是相互协调和影响的。③脾脏中广泛分布着ERα、NGF、IL-2、AR蛋白,主要分布于被膜下方的红髓区,而在白髓仅有极少量分布,mRNA分布区域与蛋白表达基本一致,仅在量上存在差异,即mRNA较蛋白表达多,表明ERα、NGF、IL-2、AR参与了脾脏免疫调节功能的发挥。去卵巢大鼠脾脏中ERα、NGF、IL-2、AR的表达强度和阳性细胞数目均显著下降,而且随着去除卵巢时间的延长下降更多。体外补充高剂量SI6周后,脾脏ERα、NGF、IL-2、AR的表达强度和阳性细胞数目基本恢复至假手术组的水平,而2周各剂量组和6M、6L组仅有部分恢复或无明显变化,表明SI通过ERα对脾脏内NGF、IL-2、AR的表达有促进作用,且存在时间和剂量的依赖性;而四者分布和强度的变化趋势一致,表明SI在脾脏中的作用是相互协调和联系的。④ERα、NGF、IL-2、AR蛋白和mRNA在下丘脑、垂体、脾脏中的分布区域基本相似,推测它们在下丘脑、垂体、脾脏可能存在共表达区域,且相互影响来调节它们在这三个组织器官中的共表达位点。而且在去卵巢和补充SI的大鼠下丘脑、垂体、脾脏中ERα、NGF、IL-2、AR分布和强度的变化趋势基本一致,表明SI对下丘脑—垂体—脾脏及ERα、NGF、IL-2、AR的作用是相互调节和影响的。⑤SI能够选择性地抑制大肠杆菌的生长,促进乳酸杆菌的生长,表明SI能够调节肠道微生物的微生态平衡。

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Abstract

符号说明

文献综述

1 大豆异黄酮的研究进展

1.1 大豆异黄酮的来源、分布及结构

1.2 大豆异黄酮的代谢

1.3 生物学功能

1.3.1 雌激素样作用

1.3.2 抗肿瘤作用

1.3.3 预防心血管疾病的作用

1.3.4 预防骨质疏松的作用

1.3.5 提高机体免疫能力

1.3.6 抗早老年性痴呆症的作用

1.3.7 抗菌消炎作用

1.4 大豆异黄酮对类固醇信号转导的作用

1.4.1 大豆异黄酮影响代谢、信号转导及基因转录的关健酶活性

1.4.2 大豆异黄酮和血清结合蛋白

1.4.3 大豆异黄酮与膜受体

1.4.4 大豆异黄酮与雌激素核受体

2 神经—免疫—内分泌的关系

2.1 免疫系统与神经系统间的相互关系

2.1.1 免疫系统对神经系统的作用

2.1.2 神经系统对免疫系统的调节

2.2 免疫系统与内分泌系统间的相互关系

2.2.1 免疫系统对内分泌系统的影响

2.2.2 内分泌系统对免疫系统的控制

2.3 内分泌系统与神经系统的相互关系

2.3.1 神经系统对内分泌系统的控制

2.3.2 神经系统对内分泌系统的控制

3 本研究的目的意义

实验一大豆异黄酮对大鼠下丘脑—垂体—脾脏ERα、NGF、IL-2、AR表达的影响

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 大豆异黄酮

1.1.2 实验动物及基础日粮

1.1.3 仪器设备

1.1.4 试剂及配置

1.2 方法

1.2.1 动物分组及饲养管理

1.2.2 取材

1.2.3 垂体中ERα、NGF、IL-2、AR蛋白和mRNA的测定

1.2.4 下丘脑和脾脏中ERα、NGF、IL-2、AR蛋白和mRNA的测定

1.2.6 显微观察、拍照及图像分析

2 结果

2.1 ERα、NGF、IL-2、AR在下丘脑中的表达及变化

2.1.1 ERα、NGF、IL-2、AR蛋白在下丘脑中分布的特点

2.1.2 大豆异黄酮对去卵巢大鼠下丘脑ERα、NGF、IL-2、AR蛋白表达的影响

2.1.3 ERα、NGF、IL-2、AR mRNA在下丘脑中分布的特点

2.1.4 大豆异黄酮对去卵巢大鼠下丘脑ERα、NGF、IL-2、AR mRNA表达的影响

2.2 ERα、NGF、IL-2、AR在垂体中的表达及变化

2.2.1 ERα、NGF、IL-2、AR蛋白在垂体中分布的特点

2.2.2 大豆异黄酮对去卵巢大鼠垂体ERα、NGF、IL-2、AR蛋白表达的影响

2.2.3 ERα、NGF、IL-2、AR mRNA在垂体中分布的特点

2.2.4 大豆异黄酮对去卵巢大鼠垂体ERα、NGF、IL-2、AR mRNA表达的影响

2.3 ERα、NGF、IL-2、AR在脾脏中的表达及变化

2.3.1 ERα、NGF、IL-2、AR蛋白在脾脏中分布的特点

2.3.2 大豆异黄酮对去卵巢大鼠脾脏ERα、NGF、IL-2、AR蛋白表达的影响

2.3.3 ERα、NGF、IL-2、AR mRNA在脾脏中分布的特点

2.3.4 大豆异黄酮对去卵巢大鼠脾脏ERα、NGF、IL-2、AR mRNA表达的影响

3 讨论

3.1 ERα、NGF、IL-2、AR在下丘脑中的分布

3.2 大豆异黄酮对去卵巢大鼠下丘脑ERα、NGF、IL-2、AR表达的影响

3.3 ERα、NGF、IL-2、AR在垂体中的表达

3.4 大豆异黄酮对去卵巢大鼠垂体ERα、NGF、IL-2、AR表达的影响

3.5 ERα、NGF、IL-2、AR在脾脏中的分布

3.6 大豆异黄酮对去卵巢大鼠脾脏ERα、NGF、IL-2、AR表达的影响

3.7 大豆异黄酮对去卵巢大鼠下丘脑—垂体—脾脏ERα、NGF、IL-2、AR表达的影响

4 结论

实验二大豆异黄酮对大鼠肠道内容物菌群的初探

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 大豆异黄酮

1.1.2 实验动物及基础日粮

1.1.3 仪器设备

1.1.4 试剂及配置

1.2 方法

1.2.1 动物分组及饲养管理

1.2.2 取材

1.2.3 样品稀释

1.2.4 样品滴种

1.2.5 细菌培养方法

1.2.6 细菌计数

2 结果

3 讨论

4 结论

参考文献

致谢

附表

图版

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大豆异黄酮对大鼠下丘脑—垂体—脾脏ERα、NGF、IL-2、AR表达的影响

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