论文摘要
目的:研究组织工程血管种子细胞的培养方法。探索血管内皮细胞（EC）和平滑肌细胞（SMC）联合培养的方法,对其培养、扩增条件加以摸索,为进一步细胞植入PGA支架及血管的构建提供支持。材料与方法:无菌条件下收集山西医科大学第一临床医学院妇产外科和山西省人民医院妇产外科2007年5月到2008年2月的分娩新鲜脐带手术标本,仔细剥离脐带动静脉,用胰酶消化法、胶原酶消化法、胰酶和胶原酶联合消化法、ROSS法进行内皮细胞和平滑肌细胞的联合培养,用含20%胎牛血清的DMEM培养液培养、扩增细胞。采用倒置相差显微镜、免疫荧光方法、免疫组织化学方法对内皮细胞和平滑肌细胞进行鉴定。对联合培养细胞进行冻存和复苏,为进一步细胞植入PGA支架提供支持。结果:经多次尝试后,采用胰酶消化法,倒置相差显微镜下观察细胞贴壁很差,几乎没有细胞生长;采用胶原酶消化法、胰酶和胶原酶联合消化法在倒置相差显微镜下亦发现细胞生长很稀少。采用ROSS法在5到7天倒置相差显微镜下观察即可看到有细胞萌出,在经过换液传代后可以培养得到一定数量的血管内皮和平滑肌细胞,在倒置显微镜显示原代细胞及经传代培养后的细胞,呈现铺路石内皮样细胞、梭型平滑肌样混合生长的特征。免疫荧光化学检测和免疫组织化学示内皮细胞Ⅷ因子、平滑肌细胞α-肌动蛋白呈阳性反应。细胞经3-5次传代,细胞数量可增殖达到8×106～10×106。结论:通过本次探索可以得到以下结论（1）脐带血管内皮细胞和平滑肌细胞联合培养能够成功。（2）胰酶消化法、胶原酶消化法、胰酶和胶原酶联合消化法联合培养细胞实验结果不理想,具体酶消化的程度和效果及作用机制有待进一步探讨。（3）使用ROSS法联合培养可获得内皮细胞、平滑肌细胞,且观察了细胞的形态和生长情况。细胞经体外联合培养、传代可以达到组织工程血管种子细胞的足够数量。（4）本实验具有较好的临床可操作性,可以为进一步细胞植入PGA支架,构建组织工程血管提供支持。
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