论文摘要
目的:观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,TRAIL）对人骨肉瘤细胞（HOS细胞株）的抑制增殖、诱导凋亡效应,并研究此过程中c-myc基因的表达规律及与凋亡效应的相关性,探讨TRAIL诱导骨肉瘤细胞凋亡的可能机制;探讨TRAIL与阿霉素（ADM）联用对HOS细胞是否具有协同杀伤作用,并初步探讨其作用机制。 方法:HOS细胞用含10%胎牛血清（FBS）的MEM（含非必需氨基酸）培养基置37℃、5%CO2孵箱培养。取指数生长期细胞,分对照组、TRAIL组、TRAIL+caspase3抑制剂组、ADM组、TRAIL+ADM组,采用MTT比色法分析细胞增殖抑制率及细胞存活率;倒置显微镜、荧光显微镜、透射电镜（TEM）观察细胞凋亡的形态变化;流式细胞术（FCM）分析细胞凋亡率和细胞周期;半定量RT-PCR方法检测细胞TRAIL受体（receptor,R）及c-myc基因mRNA的表达水平;Webb系数法来判定TRAIL和ADM的是否具有协同作用;数据采用SPSS10.0软件分析,P<0.05认为差异具有显著性。 结果:MTT比色法及FCM结果显示TRAIL对HOS细胞具有较明显的剂量依赖性的抑制效应,这种抑制效应可被caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK所阻止;Webb系数法判定0.5μg/ml TRAIL和1μg/mlADM有协同作用。 倒置相差显微镜观察TRAIL组的HOS细胞形态变化,发现0.5μg/ml以上浓度TRAIL处理的细胞在3h后即陆续出现部分细胞变小、变圆;8h后可观察到细胞膜弯曲内陷,染色质浓缩;12h后为凋亡现象的高峰期,并出现细胞核碎裂而形成的凋亡小体及部分细胞呈破裂坏死状。这一时期的透射电镜显示:凋亡细胞核分叶、核固缩,染色质浓缩聚集于核膜,呈边界分明的块状或新月体状;细胞质内细胞器尚完整,高尔基体肥大,线粒体呈空泡状。而TRAIL+caspase-3抑制剂组细胞在形态学上未观察到大量细胞凋亡的现象。TRAIL和ADM合用时可见大量细胞坏死、脱落、悬浮于培养液中。 半定量RT-PCR检测到HOS细胞TRAIL R1～R3的表达,TRAIL和ADM联用时
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