姜黄素在前列腺肿瘤细胞LNCaP中对人同源盒基因NKX3.1表达的下调作用

姜黄素在前列腺肿瘤细胞LNCaP中对人同源盒基因NKX3.1表达的下调作用

论文摘要

姜黄素(curcumin)是一种酚类色素,它是中药姜黄的主要有效成分,具有多方面的药理作用,如抗炎、抗氧化和清除自由基、降血脂,特别是它的抗诱变和抗癌作用,正日益引起人们的重视,成为研究的热点。在发达国家前列腺癌是男性肿瘤病发率最高的恶性肿瘤之一,其死亡率在诸肿瘤中高居第二位。前列腺癌的发生,发展和转移与NKX3.1有密切联系。NKX3.1是新近被发现的一种具有高度前列腺特异性的同源盒基因,在前列腺癌起始过程NKX3.1基因的杂合性缺失显得尤为重要。人的NKX3.1定位于8p2 1,包括2个外显子,1个内含子。在成年人NKX3.1主要表达于前列腺上皮,受雄激素调节。雄激素的作用由AR介导。AR是核受体家族成员,是一种雄激素依赖性的转录因子。结合雄激素活化后,同靶基因调控区中特定的DNA序列即雄激素应答元件(androgen responsive element,ARE)结合,调控靶基因的表达。 为了观察姜黄素对雄激素受体AR和NKX3.1的影响,首先,在实验中用不同浓度(10,20,30,40μmol/L)的姜黄素处理前列腺癌细胞株LNCaP细胞24小时,用RT-PCR,Western-blotting检测姜黄素对AR和NKX3.1的mRNA水平和蛋白水平的影响,并通过凝胶电泳迁移分析(EMSA)检测不同浓度的姜黄素对AR表达的影响,同时观察姜黄素对雄激素受体AR和雄激素反应元件ARE特异性结合的影响。接着,将含有NKX3.1基因5’侧启动子区1040bp DNA序列的荧光素酶表达载体pGL3-NKX3.1转染前列腺癌细胞株LNCaP,不同浓度姜黄素作用24小时后应用荧光素酶测定系统检测荧光素酶表达活性,以鉴定姜黄素对NKX3.1启动子的影响;最后分别以30μmol/L姜黄素及10-6mol/L雄激素处理

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 缩写表
  • 前言
  • (一) 同源盒基因nkx3.1
  • (二) 雄激素受体的结构和作用机制
  • (三) 姜黄素的结构,抗癌作用机理
  • 实验材料和方法
  • 一 实验仪器
  • 二 实验材料与试剂
  • 三 实验方法
  • (一) 细胞的培养
  • (二) 姜黄素溶液的配置及姜黄素处理LNCap细胞
  • (三) RT-PCR检测.NKX3.1 mRNA、AR mRNA的表达
  • (四) Western-blotting检测NKX3.1蛋白、AR蛋白的表达
  • (五) 核蛋白制备
  • (六) BCA蛋白定量测定试剂测定蛋白浓度
  • (七) 凝胶电泳迁移率分析
  • (八) PGL3-NKX3.1表达载体质粒及pRL-TK质粒大规模制备及纯
  • (九) 细胞转染实验和荧光素酶活性测定
  • 结果和讨论
  • 结果
  • 讨论
  • 总结
  • 附图
  • 参考文献
  • 致谢
  • 相关论文文献

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