论文摘要
目的:探讨分化的3T3L1脂肪细胞培养上清及未分化的3T3L1前脂肪细胞培养上清对肝细胞胰岛素信号通路、糖原合成的影响及其作用机制。方法:诱导3T3L1细胞分化成为脂肪细胞,收取分化及未分化的3T3L1细胞培养上清;用该上清分别培养小鼠原代肝细胞和HepG2细胞24小时,利用糖原染色方法（PAS染色）检测肝细胞的糖原合成功能;通过Western blot检测上述细胞胰岛素信号通路分子磷酸化水平的改变,选取磷酸化的IRS-2和Akt作为检测指标;通过流式细胞术检测细胞在上清培养后的周期变化;观察上清培养0-2小时对细胞Akt磷酸化水平的影响及加入炎症因子TNF-α后Akt磷酸化水平的改变。结果:与分化的3T3L1脂肪细胞及未分化的3T3L1细胞培养上清共培养24小时,小鼠原代肝细胞和HepG2肝癌细胞糖原合成较对照增加,同时,IRS-2（Tyr612）磷酸化水平和Akt（Ser473）磷酸化水平上调。0-2小时共培养使原代小鼠肝细胞及HepG2肝癌细胞Akt（Ser473）磷酸化水平在15分钟明显上升,30分钟达到最高,1小时后下降,2小时恢复正常水平;在脂肪细胞及3T3L1前脂肪细胞培养上清处理的同时,外源性加入10ng/ml TNF-α处理,Akt（Ser473）的磷酸化水平降到正常水平。结论:脂肪细胞及前脂肪细胞的培养上清能够促进肝细胞合成糖原,上调肝细胞IRS-2（Tyr612）、Akt（Ser473）的磷酸化水平。脂肪细胞及前脂肪细胞的培养上清培养30分钟明显上调Akt（Ser473）磷酸化水平,该作用可以被TNF-α所中和。这一结果提示在未受刺激的脂肪细胞、3T3L1前脂肪细胞,其全分泌物总的功能是增加肝细胞胰岛素敏感性的;脂肪细胞上清中可能存在某些增加胰岛素敏感性的物质,并且这种作用可以被TNF-α所抑制。
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