硫化氢对H2O2致HSCs氧化应激后细胞内Ca2+浓度影响的实验研究

论文摘要

目的：探讨硫化氢对H2O2至大鼠原代肝星状细胞（Hepatic stellate cells HSCs）氧化应激状态下细胞增殖及Ca2+浓度的影响及其作用机制。方法：大鼠原代肝星状细胞作为研究对象，将过氧化氢作用于大鼠原代肝星状细胞制造肝纤维化的氧化应激模型，用钙离子荧光探针Fluo-3/AM负载细胞，并在此基础上应用不同剂量的NaHS（H2S供体）和KATP通道抑制剂（格列苯脲）对各组细胞进行干预，用激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）和CCK-8的方法分别检测不同刺激条件对细胞内Ca2+浓度改变及细胞增殖情况的影响。结果：低浓度H2S（100μmo/L NaHS）明显降低HSCs细胞内Ca2+浓度（p<0.05），抑制细胞增殖；KATP通道阻断剂—格列苯脲可阻断H2S的作用。高浓度H2S（1mmol/L NaHS）使HSCs细胞内Ca2+浓度增加，促进细胞增殖。结论：低浓度H2S通过激活HSCs细胞KATP通道，降低细胞内Ca2+浓度，从而抑制细胞增殖；格列苯脲在一定程度上可以阻断H2S的上述作用；高浓度H2S使HSCs细胞内Ca2+浓度增加，促进细胞增殖。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 实验动物
• 2.2 实验设备
• 2.2.1 主要仪器：
• 2.2.2 主要试剂：
• 2.2.3 主要溶液的配置
• 2.3 HSCs 制备
• 2.3.1 HSCs 的分离
• 2.3.2 HSCs 原代细胞培养
• 2.3.3 HSCs 活性及性质鉴定
• 2.4 实验分组
• 2.5 实验方法
• 2+浓度测定'>2.5.1 Flu-3/AM 的荷载及 HSCs 细胞内 Ca²⁺浓度测定
• 2.5.2 CCK-8 试剂盒测定 HSCs 细胞增殖
• 2.6 实验流程
• 2.7 统计学处理
• 第三章 结果
• 3.1 大鼠原代肝星状细胞活性及性质鉴定
• 3.2. CCK-8 试剂盒测定 HSCs 细胞增殖结果
• 2+]i 荧光强度检测结果'>3.3 HSCs 细胞内[Ca²⁺]i 荧光强度检测结果
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 综述
• 参考文献
• 研究成果