论文摘要
细胞周期蛋白依赖性激酶类抑制剂是潜在的抗肿瘤药物,CDK1（Cyclin-dependent kinase 1）是丝氨酸/苏氨酸类蛋白激酶,在细胞周期G2/M点对细胞的增殖起关键控制作用。到目前为止,CDK1被认为是所有真核细胞细胞分裂的必要条件,CDK1失活将导致有丝分裂的停止。因此寻找与筛选靶向CDK1的抗肿瘤抑制剂是抗肿瘤药物发现的有效途径。为筛选靶向CDK1的有效小分子化合物和抗肿瘤中药组分的有效成分,我们建立了靶向CDK1的激酶高通量筛选平台,并采用镧系荧光免疫分析法的时间分辨原理来筛选小分子化合物库。另外,我们还采用CDK1蛋白激酶同位素分析系统,对具有抗肿瘤作用的中药组分库进行了筛选。我们筛选了240个具有潜在抑制CDK1功能的小分子化合物及具有抗肿瘤作用的中药提取液组分库中的有效中药成分。与对照相比,我们发现具有抑制活性的6个小分子化合物和5个中药组分中的单体有效成分及中药单体LA。为进一步验证上述筛选所获得的化合物的抗肿瘤作用,在肝癌细胞SMMC-7721、白血病细胞U937、白血病细胞Jurkat和乳腺癌细胞MCF-7/MIT等肿瘤细胞中,我们通过显微镜观察肿瘤细胞的形态变化,采用MTT、苔盼蓝排斥实验检测化合物对肿瘤细胞的生长抑制作用,并运用流式细胞仪分析化合物对细胞周期、细胞凋亡及细胞耐药的影响等,初步确认了有效的抗肿瘤活性化合物。