栉孔扇贝雌核发育二倍体的人工诱导和细胞学观察

论文摘要

人工诱导雌核发育（Artificially induced gynogenesis）作为现代遗传工程育种的新技术,是指用遗传物质失活但仍保持受精能力的同源或异源精子激活正常卵子发育,然后通过阻止第一、第二极体排出或第一次卵裂使染色体加倍,结果精核不形成功能性雄原核,卵细胞仅在雌核控制下发育成具有存活能力的二倍体个体。由于雌核发育后代纯属母系遗传,各基因位点容易纯合,便于快速建立纯系,因而人工诱导雌核发育技术在水产动物的遗传改良和新品种培育方面具有巨大的潜在价值。另外,作为遗传学上的稀有材料,雌核发育对性别控制、基因定位、基因-着丝粒重组、克隆等遗传学问题的研究具有重要意义。本研究以我国北方沿海的主要养殖种类栉孔扇贝为研究对象,进行了雌核发育二倍体诱导参数的优化,并用荧光显微镜观察法和组织切片法对其受精和早期卵裂的细胞学过程进行了观察和描述。获得的主要结果如下: 1.用紫外线照射法灭活精子的遗传物质,结合6-二甲基氨基嘌呤（6-DMAP）处理抑制受精卵第二极体释放,诱导栉孔扇贝雌核发育二倍体。采用中心波长254nm、光照强度800μw/cm2·s的紫外线照射栉孔扇贝精子50s,然后立即与正常卵子授精,在20℃水温下,授精后35～40min光镜下观察到20～30%卵子排出第一极体时,分别以40～80mg/L的6-DMAP持续处理受精卵10、15、20min,染色体计数和流式细胞仪分析检测各处理组二倍体率,筛选诱导栉孔扇贝雌核发育二倍体两因素的最佳组合。结果表明,60mg/L 6-DMAP处理20min组合得到了最佳效果,二倍体率为57.6%、D形幼虫率22.25%。随后对最佳条件组担轮幼虫进行了大量染色体统计和流式细胞仪分析,结果基本一致,二倍体率分别为54%、57.3%。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 1. 海洋经济贝类雌核发育的研究进展
• 1.1 贝类雌核发育的研究历史及现状
• 1.2 贝类雌核发育二倍体的诱导原理及方法
• 1.3 贝类的倍性鉴定方法
• 1.4 贝类雌核发育的细胞学及基础生物学研究现状
• 1.5 雌核发育在贝类遗传育种中的意义和应用
• 1.6 贝类雌核发育存在的问题及前景展望
• 2. 人工诱导栉孔扇贝雌核发育二倍体的初步研究
• 0. 引言
• 2.1 材料与方法
• 2.2 实验结果
• 2.3 讨论
• 3. 栉孔扇贝雌核发育二倍体发育早期的荧光显微镜观察
• 0. 引言
• 3.1 材料与方法
• 3.2 试验结果
• 3.3 讨论
• 4. 栉孔扇贝正常发育和人工雌核发育二倍体早期胚胎核行为的细胞学观察
• 0. 引言
• 4.1 材料与方法
• 4.2 试验结果
• 4.3 讨论
• 参考文献
• 致谢