热应激对牛体细胞克隆胚胎早期发育的影响

论文摘要

选取西安本地屠宰场牛卵母细胞,通过对成熟前卵母细胞进行不同温度热应激处理(对照组38.5℃,组2 39.5℃,组3 40.5℃,组4, 41.5℃,组5 42.5℃),比较重构胚的卵裂率,囊胚率,并对不同供体细胞形成的克隆胚囊胚细胞数目进行比较,研究短时间(30min)热应激对核移植后重构胚发育的影响。对未采取热应激措施卵母细胞形成的克隆胚分别在单细胞阶段和桑椹胚阶段:(1)以温度高低为标准(分组同上试验)进行30 min热应激处理,统计囊胚发育率;(2)以高于对照组温度2℃的温度热处理30min,1h,2h,统计囊胚发育率。研究热应激强度对胚胎的损伤影响。结果表明:1.卵母细胞41.5℃下30min的热应激,与对照组相比,卵裂率以及囊胚率都有显著提高(P<0.05)。但是42.5℃组,虽然卵裂率有所提高,囊胚率与对照组相比却显著降低(P<0.05)。2.用三种不同供体细胞分别进行核移植。发现热应激卵母细胞形成的克隆胚与未热应激的卵母细胞形成的克隆胚相比,在囊胚细胞数上无显著差异(P>0.05)。说明热应激不会影响胚胎的质量,并且这一结果与供体细胞的种类无关。3.对单细胞克隆胚进行30min热应激发现,随着应激温度的升高,克隆胚胎的卵裂率与对照组相比没有明显负效应(P>0.05),而囊胚发育率确逐渐降低,相比对照组,从41.5℃组开始有显著负效应(P<0.05)。4.对桑椹克隆胚进行30min热应激发现,随着应激温度升高,囊胚发育率呈下降趋势,42.5℃组与对照组相比有明显负效应(P<0.05)。5.对单细胞克隆胚进行40.5℃热应激发现,随着热应激时间的延长,胚胎发育呈下降趋势。1h以上40.5℃的热应激会显著影响胚胎的发育能力(P<0.05)。6.对桑椹克隆胚进行40.5℃热应激发现,随着热应激时间的延长,胚胎发育能力逐渐降低,但相比单细胞克隆胚,抗应激能力增强,2h以上40.5℃的热应激会显著影响胚胎的发育能力(P<0.05)。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 动物克隆技术的研究进展
• 1.1 动物克隆技术的研究简史
• 1.2 哺乳动物胚胎干细胞核移植研究进展
• 1.3 哺乳动物体细胞核移植技术研究进展
• 1.4 种间细胞核移植研究进展
• 1.5 影响细胞核移植的因素
• 1.5.1 供体细胞核的选择
• 1.5.2 卵母细胞去核效果
• 1.5.3 受体胞质的成熟程度及其激活能力
• 1.5.4 核质相互作用与细胞周期同步化
• 1.5.5 供体核的重编程
• 1.5.6 克隆胚的培养及发育
• 1.6 细胞核移植存在的问题
• 1.6.1 核移植总体效率低
• 1.6.2 流产率高，产仔率低
• 1.6.3 出生动物死亡率高、出生体重过大
• 1.7 细胞核移植技术的应用前景
• 1.7.1 扩大优良畜种或稀有动物的数量
• 1.7.2 生产转基因动物
• 1.7.3 治疗性克隆在医学领域的应用
• 1.7.4 作为辅助生殖手段，使不孕不育患者得到自己的后代
• 1.7.5 基础研究
• 第二章 热应激（热休克）反应及热休克蛋白的研究进展
• 2.1 热应激（热休克）反应的研究历史
• 2.2 热应激诱导损伤
• 2.2.1 热应激诱导氧化损伤
• 2.2.2 热应激对胚胎发育的影响
• 2.3 热应激的产物－热休克蛋白
• 2.3.1 热休克蛋白的发现
• 2.3.2 热休克蛋白的诱导因素
• 2.3.3 热休克蛋白的分类
• 2.3.4 HSP70 家族及结构
• 2.3.5 HSP70 的生物学功能
• 2.4 热应激对机体保护作用的应用
• 第三章 卵母细胞热应激对克隆胚早期发育的影响
• 3.1 材料和方法
• 3.1.1 卵母细胞的收集及处理
• 3.1.2 供体细胞的准备
• 3.1.3 体细胞核移植
• 3.1.4 核移植胚胎激活及培养
• 3.2 试验设计
• 3.2.1 卵母细胞短期热应激对重构胚胎的影响
• 3.2.2 短期热应激对克隆胚质量的影响
• 3.3 数据统计
• 3.4 结果与分析
• 3.4.1 供体细胞以及重构胚的形态学观察
• 3.4.2 不同温度下卵母细胞短期热应激对核移植后早期胚胎发育的影响
• 3.4.3 短期热应激对胚胎质量的影响
• 3.5 讨论
• 3.5.1 热应激强度的确定
• 3.5.2 不同温度下卵母细胞热应激对核移植后胚胎发育的影响
• 3.6 小结
• 第四章 克隆胚胎热应激对胚胎早期发育的影响
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 卵母细胞的收集及处理
• 4.1.2 供体细胞的准备
• 4.1.3 体细胞核移植
• 4.1.4 重构胚激活及培养
• 4.2 试验设计
• 4.2.1 单细胞克隆胚不同温度热应激对早期胚胎发育的影响
• 4.2.2 桑椹期克隆胚不同温度热应激对囊胚发育率的影响
• 4.2.3 克隆胚热应激时间长短对早期胚胎发育的影响
• 4.3 数据分析
• 4.4 结果
• 4.4.1 单细胞克隆胚不同温度热应激对早期胚胎发育的影响
• 4.4.2 桑椹期克隆胚不同温度热应激对囊胚发育率的影响
• 4.4.3 克隆胚热应激时间长短对早期胚胎发育的影响
• 4.5 讨论
• 4.5.1 不同温度短期热应激对克隆胎早期发育的影响
• 4.5.2 热应激时间长短对克隆胎的早期发育影响
• 4.6 小结
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 作者简介