论文摘要
目的：糖皮质激素（glucocorticoid,GC）是体内重要的代谢调节激素。病理浓度GC引起的骨骼肌蛋白降解是肌肉萎缩、肌肉延迟性酸痛、类固醇肌病等发生过程的重要步骤。地塞米松（dexamethasone, DEX）广泛地运用在导致骨骼肌蛋白降解的在体和离体实验中。本实验采用小鼠骨骼肌C2C12成肌细胞分化形成C2C12肌管，用DEX刺激，拟建立GC引起蛋白含量下降的细胞模型。在此基础上分别采用发光二极管阵列（light emitting diode array,LED）所产生的红光（640±17nm）【red light（640±17nm）from LED, RLED】照射和他汀类药物处理，观察其对GC引起的蛋白含量下降的调节作用。实验方法：1．用含2％的马血清的培养基诱导C2C12成肌细胞分化2-9天，用二辛可宁酸（bicinchoninic acid，BCA）法研究分化过程中C2C12细胞蛋白总量的变化特性。用分化8天的C2C12肌管开展以下实验。2．为了建立GC引起蛋白含量下降的细胞模型，分别用含0、25nM、100nM、1μM和10μM的DEX的培养基孵育C2C12肌管24h。用BCA法和Western Blot分别测定蛋白总量和α-肌动蛋白（a-actin）含量，建立GC引起蛋白含量下降的离体模型。3．为了研究RLED照射对DEX引起的蛋白含量下降的光生物调节作用，C2C12肌管加入1μM DEX后即刻用RLED（3.5mW／cm2）照射，照射时间分别为0、110s、300s、900s和1800s，继续孵育24h。用BCA法和Western Blot分别测定蛋白总量和a-actin含量。4．为了研究辛伐他汀对DEX引起的蛋白含量下降的调节作用，用加入不同浓度辛伐他汀（0、100nM、1μM和10μM）与DEX（100nM）共同孵育C2C12肌管24h，用BCA法测定蛋白总量。实验结果：1．C2C12成肌细胞分化后2-9天蛋白总量不断增加，其中分化4天至9天增幅变缓，蛋白总量维持在一个相对稳定的水平。2．浓度为25nM、100nM、1μM和10μM的DEX孵育分化8天的C2C12肌管24h均可使C2C12肌管蛋白总量显著下降，具有剂量依赖性。a-actin的蛋白印迹显示出相似的结果。100nM、1μM和10μM浓度的DEX各组对蛋白含量下降的影响彼此无显著性差异。3．不同时间（110s、300s、900s和1800s）RLED（3.5mW／cm2）照射能部分抑制DEX导致的C2C12肌管蛋白总量下降，光照效应近似正弦曲线。光照300s和900s照射组能显著的抑制DEX引起的蛋白总量和a-actin下降。4．100nM，1μM和10μM的辛伐他汀能显著地刺激C2C12肌管蛋白总量下降，这种效应呈剂量依赖性，且能显著地促进100nM的DEX对C2C12肌管蛋白含量下降的效应，但不同浓度辛伐他汀和DEX共同作用组与辛伐他汀单独作用组相比，蛋白总量没有显著性差异。结论：DEX可以显著地引起C2C12肌管蛋白含量下降。DEX的这种效应可以被RLED照射显著抑制，但被辛伐他汀显著促进。