菊花降血压有效部位的筛选及相关实验研究

论文摘要

高血压是一种发病率、致残率、死亡率较高的疾病。目前的降血压的化学合成药物大都存在作用时间短、毒副作用大、依赖性较强,治疗效果存在局限性等问题。我国医学典籍中关于中约降血压的记载颇多,中药资源丰富,价格低廉,且其毒副作用小。现在药理学研究表明,菊花提取物（Chrysanthemum morifolium extract,CME）具有治疗心血管系统疾病的作用。对菊花进行初步的研究,筛选降血压的有效部位,开发降血压新药。有非常重要的现实意义。本研究的主要内容有:（1）采用血管紧张素转化酶-底物-血管紧张素转化酶抑制剂（ACE-HHL-ACEI）反应体系,以高效液相色谱法测定反应体系中马尿酸含量,衡量ACE抑制剂的活性,追踪菊花降血压有效部位;（2）比较菊花的水、50%乙醇和95%乙醇提取物对ACE抑制作用的活性;（3）采用石油醚、乙酸乙酯和丙酮有机溶剂初步萃取分离菊花95%乙醇提取物,并研究丙酮萃取的丙酮用量、不同时间和不同温度所得的萃取物对ACE抑制作用的影响;（4）采用硅胶柱层析和半制备高效液相色谱进行进一步分离提纯菊花中丙酮萃取物;（5）将有效部位的成分的定性检测和降高血压的动物实验研究。通过以上实验,得到以下研究结果:（1）高效液相色谱法测定ACE-HHL-ACEI反应体系中马尿酸含量,马尿酸的峰面积与浓度的线性关系的相关系数r=0.9996,马尿酸的加样回收率为97.889%～105.061%,相对标准偏差（RSD）为2.53%,精密度的相对偏差（RSD）为1.97%。（2）菊花95%乙醇提取物的IC50为70.52+2.04mg/mL,比50%乙醇提取和水提物对ACE抑制作用的活力强（P＜0.05）。（3）通过石油醚、乙酸乙酯和丙酮有机溶剂对菊花95%乙醇提取物初步萃取分离,得到丙酮萃取物的IC50为14.47±1.26 mg/mL。比95%乙醇提取物对ACE抑制作用的活性明显增强（P＜0.01）。（4）通过硅胶柱层析的方法对丙酮萃取物进行再次分离,得到对ACE抑制作用最强的甲醇洗脱部位（组分5）,该部位的IC50为0.71±0.05mg/mL,对ACE抑制作用的活性进一步增强（与丙酮萃取物比较,P＜0.01）,然而半制备高效液相分离该部位,获得的18个化合物对ACE抑制作用的活性没有继续增强。说明菊花降血压的有效部位是甲醇洗脱部位（组分5）。（5）通过对甲醇洗脱部位化学成分的定性检测,可知有效部位为黄酮类化合物。体内实验结果表明低剂量（1 mg/Kg·BW）和高剂量（5mg/Kg·BW）的甲醇洗脱部位对自发性高血压大鼠血压具有降低作用（与阴性对照组比较,p＜0.01）,血清ACE活力显著降低（与阴性对照组比较,P＜0.01）。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略词
• 第1章 文献综述
• 1 高血压病概况
• 2 降高血压中药的研究现状
• 2.1 对交感神经的抑制作用
• 2.2 对钙离子通道阻断作用
• 2.3 利尿降压作用
• 2.4 对肾素—血管紧张素系统作用
• 2.5 对心脏血流动力学的作用
• 2.6 对血液流变学的作用
• 2.7 对血管内皮功能改善作用
• 2.8 对胰岛素抵抗的改善作用
• 2.9 多种降压途径的协同作用
• 3 ACE抑制剂
• 3.1 检测ACE抑制剂体外活性方法
• 3.2 ACE抑制剂研究
• 4 菊花药理及活性成分研究
• 4.1 对心血管系统的作用
• 4.2 化学成分
• 第2章 引言
• 1 研究目的与意义
• 2 研究的主要内容
• 第3章 菊花有效部位的提取与筛选
• 1 材料与仪器
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验仪器
• 2 实验方法
• 2.1 试剂配制
• 2.2 提取溶剂的选择
• 2.3 有机溶剂萃取初步分离
• 2.4 最佳萃取条件的选用
• 2.5 ACE-HHL-ACEI反应体系
• 2.6 HPLC测定的方法学评价
• 2.7 统计分析
• 3 实验结果
• 3.1 色谱分析
• 3.2 HPLC测定的方法学评价结果
• 3.3 提取物对ACE抑制作用的活性
• 3.4 萃取物对ACE抑制作用的活性
• 3.5 最佳萃取条件
• 4 小结与讨论
• 第4章 菊花有效部位的分离纯化
• 1 材料与仪器
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验仪器
• 2 实验方法
• 2.1 硅胶柱层析
• 2.2 半制备HPLC的制备条件
• 2.3 检测ACEI的活性
• 3 实验结果
• 3.1 硅胶层析柱分离丙酮萃取物所得组分对ACE抑制作用的活性
• 3.2 半制备HPLC的制备分析
• 3.3 半制备HPLC分离有效部位所得成分对ACE抑制作用的活性
• 4 小结与讨论
• 第5章 菊花有效部位成分定性及其体内降血压研究
• 1 材料与仪器
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验仪器
• 2 实验方法
• 2.1 有效部位成分的定性检测
• 2.2 动物实验
• 3 实验结果
• 3.1 定性检测实验的结果
• 3.2 对自发性高血压大鼠血压的影响
• 3.3 对自发性高血压大鼠血清ACE活力的影响
• 4 小结与讨论
• 第6章 结论与展望
• 1 结论
• 2 展望
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表的论文
• 致谢