论文摘要
目的:建立检测乳汁中SIgA含量的ELISA法;用免疫比浊法和建立的ELISA法检测各种产妇初乳和成熟乳中IgG、IgA、IgM和SIgA（secretory IgA）的含量;评价不同产妇乳汁预防新生儿感染的作用;为临床检验科建立检测SIgA的方法;为针对性地采取相应措施提供实验依据。方法:1.采用小鼠中产生的抗分泌片单克隆抗体（monoclonal anti-secretory component IgA antibody,SCMcAb）建立定量检测乳汁中SIgA酶联免疫吸附实验（ELISA）法,评价其特异性和灵敏度。2.采集不同年龄,不同分娩方式,不同营养状况产妇的初乳及成熟乳。3.分别采用免疫比浊法检测60例产妇初乳及成熟乳中IgG、IgA、IgM含量和用已建立的ELISA法检测60例产妇初乳及成熟乳中sIgA含量。4.分析不同产妇中上述各种免疫球蛋白含量的差异。结果:1.ELISA检测SIgA实验条件优化:SCMcAb最佳包被浓度为10ug/ml,酶标抗体（HRP-羊抗人IgA）工作浓度为1:5000,样品稀释度为1:1000,检测灵敏度为0.31ug/ml,检测范围在5.00ug/ml-0.31ug/ml之间,回归方程: y=0.9106+0.6534㏒ （x）,（r=0.9882,P<0.001）,平均变异系数CV为8.3%,平均回收率为98.8%,与IgG和IgA无交叉反应。2.初乳和成熟乳中IgG、IgA、IgM和sIgA含量有显著性差异（P<0.001）;高龄和低龄产妇以及顺产和剖腹产妇乳汁中IgG、IgA、IgM和sIgA含量无显著性差异（P>0.05）;农村与城市产妇初乳中IgA和SIgA含量有显著差异（P<0.05）,而IgG和IgM无显著性差异,成熟乳中IgG、IgA、IgM及SIgA含量无显著差别（P>0.05）;营养状况正常者与较差者初乳中IgG、IgA和SIgA含量有显著差别（P<0.05）,IgM无显著差别（P>0.05）。3.乳汁中IgA和SIgA含量虽有显著差别（P<0.05）,但两者含量水平呈正相关（r=0.856,t=10.94,P<0.001）,回归方程:y=0.9056+0.5097x。结论:用鼠抗人SCMcAb成功建立了定量检测乳汁中SIgA的ELISA法,具有较高的准确性、重复性和特异性,可应用于临床;母乳特别是初乳中含有丰富的免疫球蛋白,能为婴幼儿提供抵抗病原体的免疫力;母乳中IgA和SIgA较IgG和IgM更易受多种因素影响。目的:研究不同母体乳汁中分泌型免球蛋白A（SIgA）抗体特异性,分析母乳针对病原微生物特异性SIgA抗体的种类,了解重庆地区母体乳汁所哺乳的新生儿对病原微生物的抵抗力,为积极预防新生儿及婴儿感染性疾病提供实验依据。方法:以10种与新生儿,婴儿及成人感染性疾病有关的病原微生物:轮状病毒（Rotavirus,RV）,肠致病性大肠杆菌（EPEC）,福氏志贺菌（ S.flexneri,SF ） ,伤寒沙门菌（ S.typhi,ST ）,幽门螺杆菌（ H.pylori,HP ） ,空肠弯曲菌（ C.jejuni,CJ ）,柯萨奇病毒（ Coxsackieviruses,Cox ）,埃可病毒（Echovirus,） ,腺病毒（adenovirus,Aden）,呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus,RSV）为研究对象。用MA104细胞培养SA11株轮状病毒,提取病毒浓缩抗原;LB培养EPEC、SF、ST后溶解细菌并提取EPEC、SF、ST细菌抗原;商品化的CoxVB1-6型混合纯化抗原,Echo1-9型混合纯化抗原,Aden1-7型混合纯化抗原,RSV纯化抗原,HP纯化抗原,CJ纯化抗原包被聚苯乙稀板,以辣根过氧化物标记鼠抗人分泌片SCMcAb为二抗,建立检测以上10种病原体特异性SIgA的间接ELISA法,并鉴定其方法的特异性,分别检测不同地区81份初乳和成熟乳中特异性的SIgA。利用Western Blot法初步分析9例阳性的EPEC SIgA所针对的EPEC细菌蛋白。结果:1.81份初乳中抗RV、RSV、Aden、SF、EPEC、CJ、HP、Cox和Echo.SIgA阳性率分别为34.5%、23.5%、18.5%、14.8%、11.1%、9.8%、8.6%、6.2%和3.7%;81份成熟乳中抗RV、Aden、RSV、SF、EPEC和CJ SIgA阳性率分别为19.8%、7.4%、6.2%、3.7%、2.5%和2.5%。2.初乳中特异性SIgA阳性率和SIgA滴度水平均高于成熟乳（P<0.05）。3.城市产妇与农村产妇乳汁中抗RV、RSV、Aden.SIgA阳性率无显著性差异（P>0.05）,城市产妇乳汁中抗SF和EPEC.SIgA阳性率均低于农村产妇（P<0.05）。4.9例阳性的抗EPEC.SIgA均识别三条位于66KD至97KD之间EPEC细菌蛋白质。结论:母乳中含有针对抗RV、RSV、Aden、SF、EPEC、CJ、HP、Cox和Echo.9种病原体的特异性SIgA,无ST的SIgA;重庆地区母体对所哺育的新生儿和婴儿具有一定预防上述9种病原体感染的能力,而无预防ST的能力,应加强母体伤寒疫苗的免疫。
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标签：母乳论文; 免疫球蛋白论文; 酶联免疫吸附试验论文; 免疫比浊法论文; 病原微生物论文;