乌头碱对心肌细胞毒作用机制的研究

论文摘要

目的：研究乌头碱对心肌细胞毒作用机制 方法：本实验采用均匀设计和MTT方法研究乌头碱不同浓度和不同时间点对心肌细胞的影响；用H.E染色法、电子显微镜观察乌头碱最大毒性剂量及临界作用时间点对心肌细胞形态学的损伤；用细胞酶学方法、流式细胞仪、比浊法观察乌头碱对心肌细胞膜通透性、稳定性、细胞内环境、细胞能量代谢和细胞周期的影响；从而揭示乌头碱对心肌细胞毒性损伤的机制。 结果：乌头碱对心肌细胞毒最大毒性剂量是3％，其临界作用时间点为30s、1m、30m。乌头碱作用细胞后，细胞连接减少，细胞间空隙增大，细胞膜不完整、膜凸起消失；线粒体肿胀溶解，溶酶体肿胀溶解，肌丝断裂溶解，胞浆出现大量的空泡；核红染，细胞核染色质浓缩、消失；乌头碱作用的时间越长，其损伤越严重。细胞介质中LDH活力增高和MDA含量增高，ACP活力增高：Na+-K+ATP的活力、[K+]和[Mg2+]降低，[Na+]和[Ca2+]浓度升高；SDH活力降低，糖原的含量降低；cAMP／cGMP值升高；细胞G2+M、S的比值降低。 结论：乌头碱对心肌细胞的细胞核染色质、线粒体、溶酶体、肌丝、细胞膜及细胞连接都有直接的损害；乌头碱导致心肌细胞生物膜功能的损伤、能量代谢障碍、核酸的损伤、细胞增殖抑制；乌头碱对心肌细胞毒作用机制可能为：乌头碱抑制心肌细胞Na+-K+ATP活性，导致细胞内Na+浓度升高，K+浓度降低，引起细胞的兴奋性升高和细胞内Ca2+超载，导致细胞形态和功能的损伤。

论文目录

• 前言
• 1 祖国医学对毒性的认识
• 2 现代医学对毒性的认识
• 3 乌头碱的药用及毒性
• 4 本项目研究的目的意义
• 实验研究
• 1 实验材料
• 1.1 受试药物
• 1.2 实验动物
• 1.3 试剂及配制
• 1.4 实验仪器
• 2 方法与结果
• 2.1 乌头碱对心肌细胞形态学的损伤
• 2.1.1 心肌细胞原代培养方法的建立
• 2.1.2 心肌细胞原代培养生长对数期的确定
• 2.1.3 乌头碱对心肌细胞最大毒性剂量和不同时间点的确定
• 2.1.3.1 乌头碱对心肌细胞最大毒性剂量的确定
• 2.1.3.2 乌头碱最大毒性剂量不同作用时间点的确定
• 2.1.4 乌头碱对心肌细胞损伤的光学显微镜观察
• 2.1.5 乌头碱对心肌细胞损伤的电子显微镜观察
• 2.2 乌头碱对心肌细胞生物膜的影响
• 2.2.1 乌头碱对心肌细胞介质中LDH的影响
• 2.2.2 乌头碱对心肌细胞介质中MDA的影响
• 2.2.3 乌头碱对心肌细胞溶酶体中酸性磷酸酶的影响
• 2.3 乌头碱对心肌细胞内环境的影响
• 2.3.1 乌头碱对心肌细胞内电解质的影响
• + - K⁺ ATP的影响'>2.3.2 乌头碱对心肌细胞Na⁺ - K⁺ATP的影响
• 2.4 乌头碱对心肌细胞能量代谢的影响
• 2.4.1 乌头碱对心肌细胞内糖原含量的影响
• 2.4.2 乌头碱对心肌细胞中琥珀酸脱氢酶的影响
• 2.5 乌头碱对心肌细胞内cAMP/eGMP的影响
• 2.6 乌头碱对心肌细胞周期的影响
• 讨论
• 1 乌头类有毒中药与乌头碱
• 2 中药毒性与细胞毒理
• 3 乌头碱毒性靶器官与心肌细胞的关系
• 4 均匀设计与细胞毒理
• 5 乌头碱对心肌细胞毒作用机制
• 5.1 心肌细胞培养方法的建立及生长曲线的绘制
• 5.2 乌头碱对心肌细胞最大毒性剂量和临界作用时间点的选择
• 5.3 乌头碱对心肌细胞损伤机制的指标的选择
• 5.4 乌头碱对心肌细胞形态学的影响
• 5.5 乌头碱对心肌细胞生物膜的影响
• 5.6 乌头碱对心肌细胞内环境的影响
• 5.7 乌头碱对心肌细胞能量代谢的影响
• 5.8 乌头碱对心肌细胞第二信使的影响
• 5.9 乌头碱对心肌细胞细胞周期的影响
• 5.10 乌头碱对心肌细胞损伤的机制
• 6 乌头碱对心肌细胞损伤的机制与临床乌头碱中毒引起心律失常的关系
• 结论
• 问题与展望
• 参考文献
• 致谢
• 附图
• 附件1 公开发表的学术论文、专著及参加的科研项目
• 附件2 声明