寡克隆区带检测在中枢神经系统疾病中的临床价值

论文摘要

中枢神经系统（Central nervous system,CNS）产生很强的免疫应答是某些自身免疫性神经系统疾病发生发展的病理学基础,表现为脑脊液（Cerebrospinal fluid,CSF）中免疫球蛋白（Immunoglobulin,Ig）成分及含量的变化。正常血清和CSF中的Ig均是多克隆的。病理情况下,某几个无性系克隆株浆细胞异常增生,合成变性的Ig,电泳时在γ-球蛋白区靠近阴极端2cm范围内可见2条或2条以上分开的、比较狭窄、不连续、不均一的清晰蛋白区带,称为寡克隆区带（Oligoclonal bands,OCB）。1959年,Karcher,van Sande和Lowenthal用琼脂糖凝胶电泳法（Agarose gel electrophoresis,AGE）从亚急性硬化性全脑炎患者的CSFγ-球蛋白中分离出几个光密度不同的条带。1960年Kutt也发现多发性硬化（Multiple sclerosis,MS）患者CSF电泳后在靠近阴极端形成狭窄而不连续区带。1971年由Link证实其为OCB IgG区带。国内外大量研究表明,OCB对CNS疾病的诊断及鉴别诊断有一定的临床意义,尤其对MS等CNS脱髓鞘性疾病的诊断辅助价值越来越受到人们瞩目。MS是CNS脱髓鞘性疾病最典型的代表。近年来国内发病率有明显增高趋势。MS的病理改变为多灶髓鞘脱失,主要累及脑白质,脊髓、视神经等。临床表现复杂多样,多具复发-缓解特征,随着疾病发展临床症状不断加重,多次复发后出现不可逆性功能障碍。由于MS确切病因及发病机制不明,缺乏特异性的临床症状和辅助检查。因此,临床医生期望一种特异、可靠的实验诊断指标,对MS早期明确诊断和及时治疗具有十分重要的意义。OCB反映了MS患者CNS内IgG发生质的改变,是MS最常见的免疫学异常表现,也是MS最有价值的单项检测,1983年以来已被国际MS委员会作为MS诊断标准中的重要组成部分。等电聚焦电泳法（Isoelectric focusing electrophoresis,IEF）测定OCB被证实为最可靠和最敏感的方法,使MS的早期诊断、早期治疗成为现实。若排除其他CNS疾病,OCB是一项敏感的指标。OCB是病理情况下CNS产生的内源性Ig,是CNS内部对持续抗原刺激的一种特异反应,CSF中出现OCB高度提示CNS有Ig局部合成。许多CNS疾病存在鞘内IgG自身合成,OCB也可见于许多其他CNS疾病:如格林巴利综合征（Guillain Barre syndrome,GBS）等CNS自身免疫性疾病以及急性细菌性或病毒性脑膜炎、未经治疗的神经梅毒、亚急性硬化性全脑炎、风疹全脑炎、莱姆病等CNS炎性疾病,在CNS非炎性疾病如癫痫、脑血管意外、脑肿瘤、脑积水、帕金森病等中则少见。可见,OCB检测对CNS疾病的诊断及鉴别诊断有一定价值,应结合临床症状、病史以及生化、微生物等辅助检查综合分析。本研究采用美国海伦娜公司自动电泳仪及配套SPIFE IgG试剂盒检测血清和CSF样本中特异性IgG-OCB。检测方法为IEF加免疫印迹法,首先根据蛋白质的等电点不同进行电泳分离,样品的各成分在一个稳定的pH范围内电泳移动,在达到各自的等电点时停止移动,被聚集在等电点,形成单一成分的蛋白浓缩物,IEF区带分辨率高,能够区别pH单位差异仅为百分之几的蛋白质。电泳结束后,将蛋白从凝胶转移到硝化纤维素膜上,采用对IgG高度特异性抗体检测蛋白,使检测的灵敏度大大提高,用金染色法染色,背景清楚、干净、一致,可明确判别阴性样品并可提供阳性质控。IEF加免疫标记法已成为国际公认的检测OCB的金标准。国内外大量研究报道,MS等CNS脱髓鞘性疾病及很多CNS炎症性疾病均可检出OCB,但OCB类型在不同CNS疾病中的相关性及其异常的产生机制很少有文献报道。因此有必要对CNS疾病OCB类型的实际临床意义进行探讨。本研究选择2008年1月2010年1月吉林大学第一医院神经内科住院患者110例,包括MS患者33例,GBS患者16例,CNS炎性疾病32例,CNS非炎性疾病29例,检测所有患者血清和CSF配对样本中OCB,用5个公认的OCB染色型报告IgG定性结果,并测定研究对象CSF IgG,CSF总蛋白（total protein,TP）水平,对上述结果进行统计学处理,分析不同CNS疾病OCB阳性率及类型,探讨OCB对MS的诊断特征及诊断价值,并将OCB类型与CSF IgG/CSFTP比值的关系进行探讨。本研究结果显示,MS和GBS患者OCB阳性率分别为57.6%和50%,显著高于其他CNS疾病;CNS炎性和非炎性疾病OCB阳性率分别为21.9%和3.4%,二者比较有显著性差异。MS患者OCB阳性率与性别、年龄、病程与缓解复发次数无关,与疾病的活动性有关,活动期MS患者OCB阳性率高于非活动期。OCB类型与CNS疾病有一定相关性,MS以2型为主,GBS以4型为主,CNS炎性疾病以3型多见。OCB 2型诊断MS的敏感性51.5%,特异性可达98.7%,优于OCB 3型和CSF IgG/CSFTP比值,对MS临床诊断有重要价值。总之,OCB检测对MS和GBS的辅助诊断有特殊价值,对CNS炎性和非炎性疾病的鉴别诊断有一定参考价值。需结合临床表现及其它检查综合分析。

论文目录

• 提要
• 英文缩略词
• 第1章 前言
• 第2章 综述
• 2.1 寡克隆区带研究概况
• 2.2 鞘内IGG 合成指标研究概况
• 2.3 寡克隆区带与鞘内IGG 合成指标检测的临床意义
• 第3章 材料与方法
• 3.1 研究对象
• 3.2 标本收集
• 3.3 仪器设备
• 3.4 主要试剂
• 3.5 实验方法
• 3.6 统计学方法
• 第4章 结果
• 4.1 各中枢神经系统疾病组OCB 阳性率比较（表4.1）
• 4.2 MS 组不同性别、年龄、病程、活动性与复发次数OCB 阳性率比较（表4.2）
• 4.3 各中枢神经系统疾病组OCB 类型分析（表4.3，图4.1）
• 4.4 不同OCB 类型CSF IGG/CSF TP 比值比较（表4.4）
• 4.5 OCB 与CSF IGG/CSF TP 比值对MS 诊断价值评价（表4.5）
• 图4.4）'>4.6 不同类型OCB 图形（图4.2^图4.4）
• 第5章 讨论
• 5.1 鞘内免疫球蛋白合成与寡克隆区带
• 5.2 寡克隆区带与中枢神经系统疾病
• 第6章 结论
• 参考文献
• 附录
• 攻读硕士期间发表论文
• 致谢
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 导师与作者简介