论文摘要
本文以枸杞子为原料提取枸杞多糖（LBP）,选用4种不同截留分子量的超滤膜对枸杞多糖进行分级,检测不同组分的理化性质,并对其细胞凋亡诱导活性进行研究,探讨枸杞多糖分离方法、组成及理化性质与其细胞凋亡诱导活性之间的关系。分别研究了截留分子量为80 K、30K、10 K、4K的超滤膜对构杞多糖的分离条件,依次得到5个枸杞多糖组分：LBP-80,LBP-30,LBP-10,LBP-4和LBP-4p。分别采用高效液相色谱法、气相色谱法、化学比色法检测枸杞多糖的组成。测得LBP-80,LBP-30,LBP-10,LBP-4和LBP-4p的平均分子量分别为2.04×106 Da,5.48 ×105Da,3.62×106Da,5.5×104Da和1.02×104Da。各组分单糖种类基本相同,主要由岩藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖组成,各单糖比例存在着较大的差异,LBP-80中葡萄糖和鼠李糖含量低于检出限,LBP-4p和LBP-4中鼠李糖含量低于检出限；半乳糖醛酸、中性糖、蛋白质含量各不相同,LBP-30半乳糖醛酸含量最高,为48.41%±0.64%,LBP-4p中性糖含量最高,为33.93%±5.02%,LBP-80蛋白质含量最高,为7.72%±0.06%。原子力显微镜观察多糖形貌显示,LBP-80平面图显示部分呈团聚状,球状分枝状散布其间；LBP-30分子聚集在一起呈团絮状分布；LBP-10呈分布较分散的絮状和球状,有少量断链分支的存在；LBP-4多为球状或团聚状,有大量尖状突起；LBP-4p呈粒径较大的球状,分布均匀,没有链状分支的存在,表面较为平整。DSC检测结果显示,LBP-30和LBP-4吸热峰较尖窄,而LBP-80和LBP-10吸热峰宽而平,可能由于LBP-30和LBP-4分子量范围相对集中,组分相对均一,使其热力学变化温度较稳定。LBP-4p吸热曲线上出现大量不规则的细微的曲线斜率的变化,可能由于该组分极易吸潮,水分含量的变化影响其热力学变化的温度。分别采用MTT法、流式细胞仪、形态学观察等方法检测枸杞多糖对人肝癌细胞SMMC-7721细胞生长的影响,结果表明,枸杞多糖超滤组分LBP-4p、LBP-10、LBP-4、LBP-80具有抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用,LBP-4p和LBP-10细胞抑制活性较高,最高抑制率为56.1%±1.4%；细胞出现胞浆浓缩,细胞拉长,互相分散等形态变化；荧光染色后观察,细胞核明显变小,荧光分布不均匀,出现荧光碎片；LBP-4p可使人肝癌细胞SMMC-7721的细胞周期阻滞于Go/Gi期,细胞胞浆钙离子浓度明显升高。而LBP-30能够显著促进肝癌细胞生长,细胞存活率最高为183.5%±4.7%,细胞周期和钙离子检测结果表明,经LBP-30作用的细胞较对照组G0/G1期和S期细胞数增多,G2/M期细胞减少,胞浆钙离子浓度无明显变化。
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标签：枸杞多糖论文; 超滤论文; 理化性质论文; 细胞凋亡诱导活性论文;